一种复合miRNAs检测体系的构建及在体液组织属性来源鉴定中的应用研究

发布时间：2023-10-29 14:44

　　目的选取5种常见体液的10条特异性miRNAs基因,通过逆转录-终点法PCR技术构建复合扩增体系,并对体系的灵敏度进行测试,之后使用该体系检测静脉血、精液、月经血、唾液和阴道分泌液中miRNAs的表达情况。方法首先设计10条miRNAs标记的逆转录引物和cDNA扩增引物,构建10个标准miRNAs标记的荧光复合体系,并进行灵敏度测试。然后使用miRNeasy Mini Kit(QIAGEN)提取体液样本的RNA,运用荧光复合体系进行检测,并对检测结果进行分析。结果本研究得到10个标准miRNAs标记的分型结果,标准miRNAs标记的荧光复合体系的检测灵敏度为总miRNAs模板量≥1ng。静脉血样本10条miRNA检测结果:miR-451、miR-144-3p、miR-144-5p,峰值在3 000～7 000 rfu之间;月经血样本分型结果:miR-214、miR-451、miR-144-3p、miR-205-5p、miR-203-3p,峰值在800～7 000 rfu之间;阴道分泌物样本分型结果:miR-144-3p、miR-203-3p, miR-205-5p,峰值在600～3 0...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 样本
    1.2 标准体系模板制备
    1.3 逆转录反应
    1.4 荧光复合PCR扩增反应
    1.5 扩增反应产物检测及数据分析
    1.6 灵敏度测试
    1.7 实际样本提取与检测
2 结果
    2.1 10个合成标准miRNAs分型结果
    2.2 灵敏度测试
    2.3 实际样本测试
        2.3.1 样本中提取总RNA的量
        2.3.2 不同样本miRNAs分型检测结果
4 讨论



本文编号：3858286