扇贝多肽经Cathepsin B/Bid/Bax/Cyt c信号通路抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡

发布时间：2023-11-11 12:12

　　目的复制20 m J/cm2的UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡模型,从溶酶体组织蛋白酶B(Cathepsin B,Cat B)/Bid/Bax/线粒体细胞色素c(Cytochrome c,Cyt c)的角度,研究扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制UVB辐射诱导的Ha Ca T细胞凋亡的分子机制。方法建立20 m J/cm2的UVB诱导Ha Ca T细胞凋亡模型。实验设计组别:对照组、UVB模型组、UVB+1.42 mmol/L PCF组、UVB+2.84 mmol/L PCF组、UVB+5.69 mmol/L PCF组、UVB+5.68 mmol/L Vc阳性对照组、Control si RNA组、Bid-si RNA组、Bax-si RNA组和Cat B抑制剂CA-074Me(10mmol/L)组。以Hoechst 33258荧光染色法检测UVB辐射后18h细胞凋亡率,RT-PCR检测Cat B、Bid、Bax m RNA在UVB辐射后0、3、6、12、18、24h的经时表达变化,RT-PCR和Western blot分别检测P...

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中文摘要
Abstract
引言
第一章 实验材料
    1.1 主要试剂
    1.2 细胞株
    1.3 主要仪器设备
第二章 实验方法
    2.1 细胞培养及实验设计
        2.1.1 人HaCaT角质形成细胞的正常培养、冻存和复苏
        2.1.2 实验分组及UVB辐射
    2.2 实验项目及检测指标
        2.2.1 Hoechst 33258 荧光染色法检测细胞凋亡
        2.2.2 RT-PCR(Reverse Transcription PCR)反应
        2.2.3 免疫印迹Western blot
        2.2.4 siRNA脂质体转染
    2.3 统计学处理
第三章 实验结果
    3.1 UVB辐射HaCaT细胞后凋亡率的检测
    3.2 UVB辐射HaCaT细胞后Cat B、Bid、Bax m RNA表达经时变化
    3.3 PCF对UVB辐射HaCaT细胞后Cat B、Bid、Bax mRNA表达的影响
    3.4 PCF对UVB辐射HaCaT细胞后Cat B、Bid、Bax蛋白表达影响
    3.5 PCF对UVB辐射HaCaT细胞后胞浆和线粒体内细胞色素C表达的影响
    3.6 脂质体瞬时转染HaCaT细胞及转染效率的检测
    3.7 Bid-siRNA、Bax-siRNA瞬时转染和抑制剂CA-074Me对UVB辐射HaCa T细胞后Cat B、Bid、Bax表达的影响
    3.8 Bid-siRNA、Bax-siRNA瞬时转染和抑制剂CA-074Me对UVB辐射HaCa T细胞后胞浆和线粒体内Cyt c表达的影响
第四章 讨论
结论
参考文献
综述
    摘要
    引言
    1. 溶酶体内水解酶
    2. 溶酶体膜通透性改变的相关机制
        2.1 活性氧
        2.2 脂质和其代谢物
        2.3 Bcl-2 家族的促凋亡成员
        2.4 p53
    3. 溶酶体与细胞凋亡通路
        3.1 溶酶体在肿瘤细胞中的相关凋亡通路
        3.2 溶酶体在非肿瘤细胞中的相关凋亡通路
    4. 溶酶体相关疾病
    5. 小节与展望
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢



本文编号：3862572