经典Wnt通路相关基因在大鼠骨骼肌损伤后骨骼肌卫星细胞中的表达研究

发布时间：2024-03-13 19:47

　　目的:通过检测大鼠损伤骨骼肌组织中卫星细胞内经典Wnt通路下游基因MRFs以及Pax7的表达水平,分析是否呈现一定的时间规律,能否应用于损伤时间的推断。方法:1.制备成年大鼠骨骼肌挫伤模型:购买健康成年雄性SD大鼠(体重200±5 g)258只,随机选取6只用作骨骼肌卫星细胞分离提取的纯度检测实验;其余动物进行随机分组:实验组和对照组,实验组再依据不同损伤时间(0 h、4 h、8h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d)分为13个亚组,共14组,每组18只。采用改良的自由落体法制备大鼠骨骼肌挫伤模型,依据设定的时间点腹腔注射2%戊巴比妥钠(30.0 mg/100 g)麻醉过量处死大鼠,之后提取损伤区域的骨骼肌组织;对照组大鼠采用相同的方式处死并取材。2.大鼠挫伤肌组织的形态学观察:将组织块固定于4%多聚甲醛溶液48h后,制作成石蜡切片,进行HE染色,观察骨骼肌损伤区域的病理组织学特点。3.骨骼肌卫星细胞提纯检测实验:采用两步酶消化法(Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶)并结合差速贴壁法从未损伤的大鼠右后肢骨骼肌中提取并纯化出静止期骨骼肌卫星细胞群,...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
常用缩写词中英文对照表
前言
1 材料与方法
    1.1 主要试剂与仪器
    1.2 动物模型制备
        1.2.1 动物分组
        1.2.2 大鼠骨骼肌挫伤模型制备及检材提取
    1.3 HE染色
    1.4 静止卫星细胞群的提纯及鉴定
    1.5 实验组及对照组大鼠骨骼肌组织中卫星细胞的提取
    1.6细胞免疫荧光实验
    1.7 PCR 实验
        1.7.1 总RNA提取
        1.7.2 总RNA浓度及纯度检测
        1.7.3 总RNA反转录
        1.7.4 引物设计
        1.7.5 内参基因、目的基因的扩增效率及引物特异性检测
    1.8 实验结果处理
2 结果
    2.1 骨骼肌组织HE染色结果
    2.2 未损伤骨骼肌组织中提取静止的骨骼肌卫星细胞群
    2.3 挫伤骨骼肌组织中卫星细胞的免疫荧光染色结果分析
    2.4 骨骼肌卫星细胞中Pax7和MRFs mRNA的表达水平
3 讨论及结论
    3.1 分离提取及纯化肌卫星细胞方法的选择
    3.2 骨骼肌卫星细胞的鉴定及经典Wnt信号通路中参与骨骼肌损伤后修复的蛋白表达研究
    3.3 经典Wnt通路中参与骨骼肌损伤后修复的相关基因mRNA的表达研究
参考文献
综述
    1 骨骼肌卫星细胞的含量及分布
    2 骨骼肌卫星细胞的分离提取
    3 骨骼肌卫星细胞的纯化
    4 骨骼肌卫星细胞的鉴定
    参考文献
致谢
个人简介



本文编号：3927484