miR-34a高表达引发辐射诱导的γH2AX生成滞后机制研究

发布时间：2017-07-04 06:10

  本文关键词：miR-34a高表达引发辐射诱导的γH2AX生成滞后机制研究

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【摘要】：目的：通过研究电离辐射诱导微小RNA分子miR-34a对辐射损伤反应分子H2AX磷酸化激活以及DNA双链断裂损伤修复的影响,探讨miR-34a调控肿瘤细胞辐射敏感性的作用机制。方法：在非小细胞肺癌A549细胞中过表达miR-34a,利用微核实验、彗星实验检测辐照后细胞的DNA双链断裂损伤及修复情况；通过免疫印迹、免疫荧光等方法检测辐照后细胞中H2AX的磷酸化(?)γH2AX的生成情况；利用流式细胞术、CCK-8试剂盒检测细胞周期及细胞增殖情况。结果：过表达miR-34a的人非小细胞肺癌A549细胞经60Co10Gy辐照后,DNA双链断裂损伤修复延缓,细胞微核形成率增高；过表达miR-34a诱导A549细胞出现CCND1表达下调和G0/G1期阻滞现象,并导致辐照诱导的H2AX磷酸化激活延迟；A549细胞同步化于G0/G1期时,同样出现H2AX磷酸化延迟现象。结论：肺癌细胞A549中过表达miR-34a可通过调控细胞周期素分子CCND1等的表达诱导细胞G0/G1阻滞,进而延迟辐射损伤反应分子H2AX的磷酸化激活,影响DNA双链断裂损伤修复,调节肿瘤细胞辐射敏感性。 目的：研究肿瘤细胞中RNA结合蛋白Ro60的表达情况及Ro60对肿瘤细胞增殖及辐射诱导增殖抑制等的影响。方法：利用肿瘤组织芯片检测不同类型的肿瘤组织及其癌旁组织中Ro60的表达情况；免疫组化检测肺癌临床样本中Ro60的表达情况；CCK8试剂盒检测细胞增殖及电离辐射反应中Ro60对细胞增殖的影响。结果：多种肿瘤组织中自身抗原Ro60的蛋白表达较癌旁组织异常增高或发生亚细胞分布改变。在肺癌、直肠癌、乳腺癌、胰腺癌等肿瘤组织中Ro60的胞浆/胞核表达异常增高；在食管癌、结肠癌肿瘤组织中Ro60的胞浆/胞核分布异常,胞浆中Ro60蛋白显著增加；而胃癌、肝脏癌、肾癌等肿瘤组织中Ro60的表达与癌旁对照无显著差异。在肺癌临床样本中Ro60在肿瘤组织中的表达明显高于癌旁组织；敲低表达Ro60的肺癌细胞系801C、801D增殖减慢。下调肺癌细胞中Ro60表达能够增进电离辐射引发的肿瘤细胞增殖抑制。结论：肿瘤组织中Ro60的异常高表达与肿瘤细胞的恶性增殖及放疗抗性相关。
【关键词】：miR-34a 电离辐射 γH12AX G0/G1阻滞 Ro60 电离辐射 肺癌 细胞增殖
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R730.55;R734.2
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-11
• 插图和附表清单11-12
• 缩略语12-14
• 前言14-18
• 材料与方法18-30
• 1. 实验材料18-20
• 1.1 细胞系18
• 1.2 主要实验试剂与材料18
• 1.3 主要仪器18-19
• 1.4 miRNA mimics19
• 1.5 引物19-20
• 2. 主要试剂的配制方法20-22
• 2.1 细胞培养20
• 2.2 免疫印迹20-21
• 2.3 免疫荧光21
• 2.4 彗星实验21-22
• 2.5 细胞周期检测22
• 3. 实验方法22-30
• 3.1 细胞培养22-23
• 3.2 实时定量PCR检测23-25
• 3.3 免疫印迹分析25-27
• 3.4 免疫荧光27-28
• 3.5 彗星实验28
• 3.6 微核检测28-29
• 3.7 细胞增殖检测29
• 3.8 细胞周期检测29
• 3.9 统计学处理29-30
• 实验结果30-36
• 1. miR34a调控A549细胞的DSBs损伤修复30
• 2. miR34a调控电离辐射诱导的DSBs损伤修复30-31
• 3. 肺癌细胞株A549中过表达miR-34a导致IR诱导的H2AX磷酸化修饰滞后31-33
• 4. miR-34a过表达导致肺癌细胞A549中CCND1表达下调和G0/G1阻滞33-34
• 5. G0/G1阻滞导致肺癌细胞A549辐射后H2AX磷酸化修饰延迟34-36
• 结论36
• 讨论36-39
• 参考文献39-42
• 肿瘤细胞中Ro60的表达及其功能初探42-65
• 摘要42-43
• ABSTRACT43-44
• 插图和附表清单44-45
• 缩略语45-46
• 前言46-48
• 材料与方法48-54
• 1. 实验材料48-50
• 1.1 细胞系及临床样本48
• 1.2 Ro60过表达质粒及干涉序列48
• 1.3 主要试剂和材料48-49
• 1.4 主要实验仪器49
• 1.5 引物49-50
• 2. 主要试剂的配制方法50
• 3. 实验方法50-54
• 3.1 免疫组化50-51
• 3.2 转化及质粒提取51-52
• 3.3 细胞培养52
• 3.4 转染52
• 3.5 免疫印迹分析52-53
• 3.6 实时定量PCR检测53
• 3.7 细胞增殖检测53
• 3.8 统计学处理53-54
• 实验结果54-61
• 1. 多种肿瘤组织中Ro60蛋白表达增高54-55
• 2. 多种肿瘤组织中自身抗原Ro60的蛋白亚细胞分布改变55-56
• 3. Ro60在肺癌中高表达56-57
• 4. Ro60调控肿瘤细胞增殖57-59
• 5. Ro60调控肿瘤细胞对辐射的反应性59-61
• 结论61-62
• 讨论62-64
• 参考文献64-65
• 致谢65-66
• 附表66-72
• 附录A 攻读硕士期间发表论文目录72-73
• 附录B 其他需要说明的内容73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 楼敏铭;张兴;田宝磊;刘继来;刘斌;张令强;郑晓飞;宋宜;孙志贤;;肿瘤细胞中Ro60的表达及其对肿瘤细胞辐射敏感性的影响[J];军事医学;2013年04期

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本文编号：516639