EGCG对慢性低剂量X线辐射诱导的细胞DNA甲基化影响的研究

发布时间：2017-08-14 09:14

  本文关键词：EGCG对慢性低剂量X线辐射诱导的细胞DNA甲基化影响的研究

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【摘要】：背景： 电离辐射是一类公认的具有基因毒性的致癌因子。目前低剂量电离辐射所产生的健康危害及其可能的致癌作用受到了人们的广泛关注。然而,低剂量电离辐射所致的生物学效应不同于高剂量辐射的线性无阈模式,其本质可能与DNA甲基化相关。目前国内外研究对于低剂量辐射诱导的表观遗传学改变多集中在急性照射方面,仅几位学者报道了慢性低剂量辐射诱导DNA甲基化改变的体内研究结果,但在体外实验方面未见报道。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),作为天然物质茶多酚中的单体,研究表明它具有抗氧化、抗肿瘤、抗辐射等生物学功能。然而,目前EGCG逆转DNA甲基化改变仅见于抗肿瘤研究中,EGCG是否也通过影响DNA甲基化途径起辐射防护作用仍未见报道。 目的： 探讨低剂量辐射是否能诱导L-02、HUVEC细胞发生DNA甲基化,及EGCG对慢性低剂量辐射所诱导的DNA甲基化的影响。从表观遗传学DNA甲基化方面来阐述慢性低剂量辐射损伤的机制,为辐射损伤防护提供新的绿色靶点。 方法： 人正常细胞(L-02细胞、HUVEC细胞)经分次低剂量X线照射后,检测其全基因组DNA甲基化的改变,MGMT、P53的表达及其启动子甲基化的状态；用MTT法计算出EGCG的安全浓度；人正常细胞(L-02、HUVEC细胞)经EGCG孵育后再经慢性低剂量X线照射后,检测其全基因组DNA甲基化的改变,MGMT、P53的表达及其启动子甲基化的状态。 结果： 1.低剂量X线照射对全基因组DNA甲基化水平的影响：在L-02、HUVEC细胞,慢性低剂量X线照射组(5cGy/d×5d/10d)与急性低剂量组(50cGy/d×1d)较不照射对照组(0cGy),全基因组DNA甲基化水平均明显降低(P0.05)。 2.低剂量x线照射对P53蛋白含量的影响：在L-02、HUVEC细胞,不照射对照组(0cGy),急性照射组(50cGy/d×1d)与慢性照射组(5cGy/d×5d/10d)之间P53蛋白含量均无统计学差异(P0.05)。 3.低剂量X线照射对MGMT表达的影响：在L-02、HUVEC细胞,慢性低剂量X线照射组(5cGy/d×5d/10d)较不照射组(0cGy)、急性低剂量组(50cGy/d×1d), MGMT表达水平均明显降低。 4.低剂量x线照射对MGMT启动子甲基化状态的影响：在L-02、HUVEC细胞,慢性低剂量X线照射组(5cGy/d×5d/10d)较不照射组(0cGy)、急性低剂量组(50cGy/d×1d), MGMT启动子均处于完全甲基化状态。 5. EGCG安全浓度的筛选：EGCG随着浓度的降低,L-02、HUVEC细胞生存率相应增大,均呈现剂量依赖性(5000μ/M、250μM、1250μM、313μM、20μM)。在EGCG (78μM,20μM)孵育12h、24h、48h、72h后,两细胞系的生存率均达85%以上,故选用50μM、20μM为EGCG的安全浓度。 6. EGCG对慢性低剂量X线照射(5cGy/d×10d)后全基因组DNA甲基化水平的影响：在HUVEC细胞,EGCG (20μM、50μM组较EGCG (0μM)组,全基因组DNA甲基化水平均明显升高(P0.05),与阳性对照组(5-Aza-CdR5μM)全基因组DNA甲基化升高水平无明显差异(P0.05)；在L-02细胞,各组间全基因组DNA甲基化水平均无明显差异(P0.05)。 7. EGCG对慢性低剂量X线照射后P53蛋白含量的影响：在L-02、HUVEC细胞,EGCG (0μM、20μM、50μM)组及阳性对照组(5-Aza-CdR5μM)对慢性低剂量X线照射(5cGy/d×10d)后P53蛋白含量均无统计学差异(P0.05)。 8. EGCG对慢性低剂量X线照射(5cGy/d×5d/10d)后MGMT表达的影响：在L-02、HUVEC细胞,EGCG组较EGCG组,MGMT表达水平均明显升高,与阳性对照组(5-Aza-CdR5μM) MGMT表达水平相仿。 9. EGCG对慢性低剂量X线照射(5cGy/d×5d/10d)后MGMT启动子甲基化状态的影响：在L-02、HUVEC细胞,EGCG组较EGCG组,MGMT启动子处于非甲基化状态,与阳性对照组(5-Aza-CdR5μM)结果一致。 结论： 低剂量X线辐射易诱导全基因组及MGMT启动子DNA甲基化状态的改变,且慢性照射组较急性照射组更易诱导全基因组DNA甲基化水平的降低及MGMT启动子的甲基化。EGCG能逆转慢性低剂量辐射所致全基因组低甲基化及MGMT启动子DNA甲基化状态,并上调其表达。慢性低剂量辐射可能通过累积异常的DNA甲基化而成为辐射相关疾病的强烈诱导剂,EGCG可能通过表观遗传学调控DNA甲基化而成为一天然的有潜力的辐射损伤防护物质。
【关键词】：EGCG 低剂量辐射 全基因组DNA甲基化 启动子甲基化 MGMT
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R818
【目录】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-7
• 目录7-9
• 符号说明9-11
• 引言11-14
• 第一部分：低剂量X线辐射对L-02、HUVEC细胞DNA甲基化的影响14-29
• 1 材料与方法14-23
• 2 结果23-26
• 2.1 低剂量X线辐射对全基因组DNA甲基化水平的影响23-24
• 2.2 低剂量X线辐射对P53蛋白含量的影响24-25
• 2.3 低剂量X线辐射对MGMT表达的影响25-26
• 2.4 低剂量X线辐射对MGMT启动子甲基化状态的影响26
• 3 讨论26-29
• 第二部分：EGCG对慢性低剂量X线辐射诱导的细胞DNA甲基化的影响29-39
• 1 材料与方法29-31
• 2 结果31-37
• 2.1 EGCG安全浓度的筛选31-32
• 2.2 EGCG对慢性低剂量X线辐射后全基因组DNA甲基化水平的影响32-34
• 2.3 EGCG对慢性低剂量X线辐射后P53蛋白含量的影响34
• 2.4 EGCG对慢性低剂量X线辐射后MGMT表达的影响34-35
• 2.5 EGCG对慢性低剂量X线辐射后MGMT启动子甲基化状态的影响35-37
• 3 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 创新点44-45
• 综述45-53
• 参考文献49-53
• 致谢53-54
• 攻读硕士学位期间论文发表54-55

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本文编号：671883