黄芪甲苷对肝细胞放射损伤的防护作用及机制研究

发布时间：2017-08-23 14:32

  本文关键词：黄芪甲苷对肝细胞放射损伤的防护作用及机制研究

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【摘要】：目的:观察黄芪甲苷对肝细胞L-02的辐射防护作用,并对其相关机制进行研究,为开发新辐射防护药物提供实验依据。方法:实验分为对照组、黄芪甲苷组、辐照组、黄芪甲苷+辐照组。采用MTT法检测黄芪甲苷对肝细胞L-02在不同时间的毒性作用,选出合适的黄芪甲苷浓度;给予0、0.5、1、2、4、6、8 Gy的137Cs-γ射线照射后24、48、72 h采用MTT法检测电离辐射对细胞存活率的影响,选出合适的辐照剂量;通过MTT法检测黄芪甲苷对辐照后细胞存活率的影响;克隆形成实验观察黄芪甲苷对辐照后L-02细胞克隆形成的影响;生长曲线法观察黄芪甲苷对L-02细胞的增殖能力的影响;DCFH-DA法检测活性氧(ROS)含量;微板法检测丙二醛(MDA)含量及还原型谷胱甘肽(GSH)活力;WST-1法检测总超氧化物歧化酶(SOD)活力;流式细胞术检测黄芪甲苷对辐照后L-02细胞凋亡率及细胞周期的影响;罗丹明123荧光探针检测黄芪甲苷对辐照后L-02细胞线粒体膜电位的改变的影响;免疫荧光共聚焦显微镜观察γH2AX焦点数;Western Blot检测各组Nrf2、HO-1、NQO1的蛋白表达。结果:1.MTT结果显示不同浓度的黄芪甲苷作用L-02细胞不同时间后,细胞存活率无显著差异;辐照后细胞存活率随受照剂量增大而降低,随辐照后时间增长而降低。黄芪甲苷能够恢复辐射损伤后L-02细胞的增殖能力,抑制辐射所致的胞内ROS和MDA含量升高,同时使胞内SOD和GSH活力有所恢复。2.流式细胞术检测细胞凋亡结果显示辐照后细胞凋亡率随着药物浓度的增加而降低;细胞周期结果显示黄芪甲苷能有效的缓解电离辐射引起的细胞G2期阻滞;罗丹明123染色结果显示,黄芪甲苷+辐照组细胞线粒体膜电位均高于辐照组。3.激光共聚焦显微镜结果显示黄芪甲苷+辐照组γH2AX焦点数明显少于辐照组。4.Western Blot结果显示:辐照组细胞内Nrf2、HO-1及NQO1表达升高,黄芪甲苷+辐照组Nrf2、HO-1及NQO1表达则是随着药物浓度增加而降低。结论:1.电离辐射诱导L-02细胞DNA损伤、G2期阻滞,细胞存活率降低。2.终浓度为20-80μg/mL的黄芪甲苷对L-02细胞没有明显的细胞毒性,并且具有较好的辐射防护效果。3.黄芪甲苷可能是通过清除辐照后L-02细胞内升高的自由基、增高细胞线粒体膜电位、恢复抗氧化酶活力、减少G2/M期阻滞比例降低γ射线诱发的氧化损伤发挥辐射防护作用。4.黄芪甲苷可通过Nrf2途径来减轻电离辐射所致的损伤。
【关键词】：黄芪甲苷 电离辐射 辐射防护 活性氧 Nrf2 L-02
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.55
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 第1章 前言13-19
• 第2章 材料与方法19-33
• 2.1 实验材料19-23
• 2.1.1 实验细胞及其培养19
• 2.1.2 实验药物的配制及其分组19-20
• 2.1.3 辐照参数20
• 2.1.4 主要试剂20-21
• 2.1.5 主要仪器21
• 2.1.6 主要试剂的配制21-23
• 2.2 实验方法23-31
• 2.2.1 MTT检测细胞存活率23-24
• 2.2.2 生长曲线法观察黄芪甲苷对L-02细胞增殖能力的影响24
• 2.2.3 细胞克隆形成实验检测黄芪甲苷对L-02细胞的辐射防护作用24-25
• 2.2.4 检测L-02细胞内活性氧（ROS）含量的改变25
• 2.2.5 检测L-02细胞中的超氧化物歧化酶（SOD）活力改变25-27
• 2.2.6 检测L-02细胞中的还原型谷胱甘肽（GSH）活性的改变27
• 2.2.7 检测L-02细胞中的丙二醛（MDA）含量的改变27-28
• 2.2.8 流式细胞术检测L-02细胞凋亡28
• 2.2.9 荧光分光光度法检测线粒体膜电位（MMP）28-29
• 2.2.10 流式细胞术检测L-02细胞的周期分布29
• 2.2.11 免疫荧光法观察γH2AX29-30
• 2.2.12 Western Blot法检测细胞内Nrf2、HO-1、NQO1蛋白的表达30-31
• 2.3 统计分析31-33
• 第3章 结果33-47
• 3.1 黄芪甲苷与电离辐射对L-02细胞存活率的影响33-35
• 3.2 黄芪甲苷对L-02细胞增殖能力的影响35
• 3.3 克隆形成实验检测黄芪甲苷对L-02细胞的辐射防护作用35-36
• 3.4 L-02细胞的ROS含量改变36-37
• 3.5 L-02细胞的GSH和SOD活力及MDA含量的改变37-38
• 3.6 流式细胞术检测黄芪甲苷对辐照后L-02细胞凋亡的影响38-39
• 3.7 黄芪甲苷对辐照后L-02细胞线粒体膜电位的影响39
• 3.8 流式细胞术检测黄芪甲苷对辐照后L-02细胞周期的影响39-41
• 3.9 黄芪甲苷对辐照后L-02细胞γH2AX免疫荧光foci的影响41-42
• 3.10 Western Blot检测细胞内蛋白的表达42-47
• 3.10.1 黄芪甲苷对辐照后L-02细胞Nrf2表达的影响42-43
• 3.10.2 黄芪甲苷对辐照后L-02细胞HO-1 表达的影响43
• 3.10.3 黄芪甲苷对辐照后L-02细胞NQO1表达的影响43-47
• 第4章 讨论47-55
• 4.1 黄芪甲苷与电离辐射对L-02细胞生长增殖的影响48
• 4.2 黄芪甲苷对辐射后L-02细胞抗氧化能力的影响48-49
• 4.3 黄芪甲苷对L-02细胞凋亡及线粒体膜电位的影响49-51
• 4.4 黄芪甲苷对辐照后L-02细胞周期改变的影响51-52
• 4.5 黄芪甲苷对L-02细胞DNA损伤后γH2AX foci形成的影响52
• 4.6 黄芪甲苷对L-02细胞Nrf2相关蛋白表达的影响52-55
• 第5章 结论55-57
• 参考文献57-65
• 综述65-73
• 参考文献70-73
• 附录73-75
• 作者攻读学位期间的科研成果75-77
• 致谢77

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本文编号：725588