Spred-2基因的缺失与四氯化碳诱导的慢性肝损伤和纤维化关系的研究

发布时间：2017-08-31 01:43

  本文关键词：Spred-2基因的缺失与四氯化碳诱导的慢性肝损伤和纤维化关系的研究

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【摘要】：背景：肝脏纤维化可以由多种因素导致,在临床上多见由病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝、自身免疫性疾病。肝脏纤维化是肝内结缔组织异常增生,导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉淀的病理过程。目前认为肝星状细胞是细胞外基质的主要来源。在正常的肝脏中肝星状细胞位于腔隙中以及主要储存维他命A.伴随着慢性损伤,肝星状细胞被激转化成类成纤维细胞具有促进炎症发生和纤维发生的功能.已激活的肝星状细胞向组织修复处迁移和增殖,分泌大量细胞外基质以及调节胞外基质的裂解。主要由Kupffer细胞产生的血小板衍生因子是肝星状细胞的主要刺激因子。MAPK信号通路涉及慢性肝损伤和肝脏纤维化的发生发展过程。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)有一个关键的作用是将细胞外信号转导到细胞核,因此导致了许多细胞的反应,包括增殖,分化,和特定的代谢调节途径。Spred-2基因可以阻碍Ras蛋白依赖的胞外信号调节激酶的信号通路,但是其具体调控机制到目前为止仍旧未能探究清楚。目的：检测四氯化碳和橄榄油处理的野生型小鼠和Spred-2基因敲除小鼠的肝脏中,多种细胞因子和趋化因子如TGF-b、IFN-g、CXCL2、CXCL9、CXCL10、以及纤维化的标志物a-SMA、Collagen-1的mRNA水平的表达。再采用免疫印迹的方法测定蛋白质水平下的a-SMA表达,以及使用Sircol测定蛋白质水平下的Collagen-1的表达。为了探索Spred-2基因在Ras/ERK信号通路下由四氯化碳诱导的慢性肝损伤和纤维化中的调控作用。方法：在这个慢性肝损伤模型中使用同窝出生的Spred-2基因敲出鼠和野生型鼠。Spred-2基因敲除小鼠和野生型小鼠接受四氯化碳腹腔注射2ml/kg,每周三次处理(四氯化碳：橄榄油,1：4,[V：V])以及按体重注射总共持续6周。对照组的Spred-2基因敲除小鼠和C57BL/6J小鼠根据体重接受橄榄油处理。在最后一次注射48小时后,处死小鼠,收集血液和小鼠肝脏。将小鼠肝脏分为三部分,其中一部分包埋于石蜡中作染色用,一部分迅速冷冻于液氮中作免疫印迹用,第三部分置于RNA later试剂中作实时聚合酶链反应用,使用组织学、a-SMA的免疫组织化学法、实时聚合酶链反应等方法来展示肝脏病理的发生发展过程。结果：肝脏长期暴露于四氯化碳中,肝脏损伤后炎症细胞的大量募集导致炎症反应,表现为肝脏细胞的损伤、坏死、以及肝脏结构的破坏。与野生型小鼠相比,在四氯化碳的诱导下Spred-2基因敲除鼠显示出明显更严重的肝损伤和纤维化。结论：(1)在四氯化碳诱导的慢性肝纤维化模型中,含有Spred-2基因的小鼠肝损伤和炎症都显著较轻,提示Spred-2基因在慢性肝脏损伤和炎症中可能对肝细胞具有保护作用。(2)在四氯化碳诱导的慢性肝纤维化模型中,含有Spred-2基因的小鼠肝脏纤维化明显较轻,提示Spred-2基因在肝脏纤维化中可能延缓肝脏纤维化的发展,可能成为四氯化碳诱导的慢性肝脏纤维化新的治疗靶点。
【关键词】：细胞外基质丝裂原活化蛋白激酶Sprouty相关EVH1域含蛋白质肝星状细胞
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：D919
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 材料和方法12-19
• 小鼠12
• 四氯化碳诱导慢性肝损伤和纤维化的发生12
• 细胞因子的测定12-13
• 胶原蛋白的检测反应13-14
• 实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和反转录14-16
• 免疫印迹分析16-17
• 肝损伤和肝纤维化的定量评估17-18
• 马松染色步骤18
• Statistics统计分析18-19
• 结果19-20
• (一) Spred-2基因的缺乏加重了小鼠肝脏损伤和炎症19
• (二) Spred-2基因的缺乏加剧了肝脏纤维化19-20
• 讨论20-30
• 结论30-31
• 参考文献31-36
• 综述36-50
• 概述36
• 介绍36-37
• 肝星状细胞的活化37
• 丝裂原活化的蛋白激酶与细胞增殖37-38
• 粘着斑激酶活化造血干细胞的增殖38
• 磷脂酰肌醇3激酶,Akt的,和p70S6激酶和细胞增殖38-40
• P13K信号和胶原基因的表达40
• 转化生长因子-B(TGF—b)介导的在肝星状细胞的胶原表达40-41
• 在体内PI3K作用的评价41
• 总结41-43
• 参考文献43-50
• 致谢50

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1 陈诚;Spred-2基因的缺失与四氯化碳诱导的慢性肝损伤和纤维化关系的研究[D];大连医科大学;2015年

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本文编号：762747