丹参酮ⅡA磺酸钠对放射性心肌细胞损伤的保护作用及机制研究
本文关键词：丹参酮ⅡA磺酸钠对放射性心肌细胞损伤的保护作用及机制研究
更多相关文章： X射线 放射性心脏损伤 丹参酮ⅡA磺酸钠 氧化应激 凋亡
【摘要】：目的:氧化应激诱导心肌细胞凋亡是放射性心脏病(RIHD)主要的发病机制,最终会导致心力衰竭,但目前,针对RIHD的治疗,并无特效药物,多是对症治疗,当出现心力衰竭时,有效的治疗方法就是心脏移植。抑制氧化应激反应可以防止心肌细胞凋亡,对RIHD起到保护作用。丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)具有抗氧化应激的作用,因此,培养H9c2心肌细胞,建立X射线损伤模型,从细胞水平探讨STS对H9c2心肌细胞辐射损伤的保护作用及相关机制,为RIHD的防治提供新的途径。方法:(1)X射线诱导H9c2细胞凋亡用含10%FBS的DMEM F12培养基培养细胞,将细胞分为5组:1空白对照组(Con)22Gy组34Gy组46Gy组58Gy组,分别照射相应剂量的X射线。MTT法测定细胞存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)水平,细胞平板克隆,Hochest33258荧光染色,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布,Western blot检测细胞中凋亡蛋白及p38MAPK信号通路蛋白表达水平。(2)STS对放射性心肌细胞损伤的保护作用用含10%FBS的DMEM F12培养基培养细胞,MTT法测定STS作用浓度,然后将细胞分为5组:1空白对照组(Con):无X射线照射,无STS22Gy+STS(2STS)组:用10μg/m L的STS预先处理细胞,然后照射2Gy的X射线34Gy+STS(4STS)组:用10μg/m L的STS预先处理细胞,然后照射4Gy的X射线46Gy+STS(6STS)组:用10μg/m L的STS预先处理细胞,然后照射6Gy的X射线58Gy+STS(8STS)组:用10μg/m L的STS预先处理细胞,然后照射8Gy的X射线。MTT法测定细胞存活率,比色法测定LDH、SOD以及MDA含量,细胞平板克隆,Hochest33258染色,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,Western blot检测细胞中的蛋白表达水平。结果:(1)倒置相差显微镜细胞形态学观察:与空白对照组相比,单纯照射各组内细胞变圆或呈畸形,细胞数目明显减少;与相应剂量单纯照射组相比,STS预处理后细胞数目明显增多;与空白对照组相比,STS预处理各组细胞数目均减少,其中6STS、8STS组细胞数目减少明显。(2)MTT、LDH细胞活力检测:与Con相比,单纯照射组(4Gy、6Gy、8Gy)细胞存活率明显降低(P㩳0.05),LDH含量明显增高(P㩳0.05);与相应剂量单纯照射组相比,STS预处理组(4STS、6STS、8STS)细胞存活率增高(P㩳0.05),LDH含量明显降低(P㩳0.05);与Con组相比,STS预处理各组细胞存活率降低,其中8STS组细胞数目明显减少,具有统计学意义(P㩳0.05),LDH含量均增高,其中6STS、8STS组LDH含量增加具有统计学意义(P㩳0.05)。(3)氧化损伤相关酶检测:与Con相比,单纯照射各组SOD含量明显降低,MDA明显升高(P㩳0.05);与相应剂量单纯照射组相比,STS预处理各组SOD升高,MDA降低(P㩳0.05);与Con相比,STS预处理组(4STS、6STS、8STS)SOD含量降低,MDA含量升高(P㩳0.05)。(4)细胞平板克隆实验检测:与Con组相比,单纯照射各组克隆形成率均明显降低,且呈剂量依赖性(P0.05);与相应剂量单纯照射组相比,STS预处理各组克隆形成率均明显增高(P0.05),其中2STS组克隆形成率几乎恢复到空白组水平;与Con相比,除了2STS组,其它STS预处理组克隆形成率降低,差异具有显著性(P0.05)。(5)Hochest33258细胞凋亡形态学检测:与Con组相比,单纯照射组细胞核凝聚显著增强,凋亡小体数目明显增多,尤其是8Gy组;与相应剂量单纯照射组相比,STS预处理组细胞核凝聚减轻,凋亡小体数目减少;与Con相比,STS预处理组细胞核凝聚增强,凋亡小体数目增多。(6)流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期:与Con组相比,单纯照射组(4Gy、6Gy、8Gy)细胞凋亡数目明显增多,G1期细胞比例逐渐增加,S期细胞比例显著降低(P0.05);与相应剂量单纯照射组相比,STS预处理组细胞凋亡数目明显减少,G1期细胞比例降低,S期细胞比例增加(P0.05);与Con相比,STS预处理组(6STS、8STS)细胞凋亡增加,G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低(P0.05)。(7)Western blot检测凋亡蛋白及P38-MAPK信号转导通路相关蛋白表达量:与Con组相比,单纯照射组(4Gy、6Gy、8Gy)Caspase-3、Bax/Bcl-2蛋白表达显著上调(P0.05),P-P38、P-ERK蛋白表达显著下调(P0.05);与相应剂量单纯照射组相比,STS预处理组Caspase-3、Bax/Bcl-2蛋白相对表达量显著下调(P0.05),P-P38蛋白表达显著上调(P0.05)。结论:X射线通过氧化应激反应损伤H9c2心肌细胞,抑制其增殖,诱导细胞凋亡。STS能够减弱氧化应激反应,调节细胞周期分布,从而抑制心肌细胞凋亡。因此,STS可用于防治RIHD。
【关键词】：X射线 放射性心脏损伤 丹参酮ⅡA磺酸钠 氧化应激 凋亡
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.55
【目录】：
- 摘要5-8
- ABSTRACT8-12
- 缩略词表12-13
- 前言13-15
- 实验研究15-41
- 技术路线图15-16
- 第一章 X射线对H9c2心肌细胞损伤的实验研究16-37
- 引言16
- 1 材料与方法16-19
- 1.1 主要仪器与试剂16-18
- 1.2 细胞培养基本设备和试剂配置18-19
- 2 方法19-28
- 2.1 H9c2大鼠心肌细胞株培养19
- 2.2 放射性心肌细胞损伤模型的建立及分组19
- 2.3 MTT检测细胞存活率19-20
- 2.4 标本检测方法20-22
- 2.5 细胞平板克隆形成实验22-23
- 2.6 Annexin-V/PI染色，流式细胞仪检测细胞凋亡23
- 2.7 细胞周期阻滞23-24
- 2.8 Hochest 33258染色检测细胞凋亡24
- 2.9 Western blot蛋白表达量检测24-28
- 3 统计学处理28
- 4 结果28-37
- 4.1 X射线损伤对H9c2细胞形态学的改变28
- 4.2 X射线对H9c2细胞存活率的影响28-29
- 4.3 X射线对H9c2细胞损伤的影响29-30
- 4.4 X射线对H9c2细胞氧化应激的影响30-32
- 4.5 X射线对H9c2细胞增殖能力的影响32-33
- 4.6 Hochest33258染色法观察X射线诱导的H9c2细胞凋亡33
- 4.7X射线损伤对H9c2细胞凋亡率的改变33-35
- 4.8 X射线对H9c2细胞周期的影响35-36
- 4.9 Western blot蛋白表达量检测结果36-37
- 第二章 丹参酮ⅡA磺酸钠对放射性心肌细胞损伤保护作用的研究37-41
- 引言37-38
- 1 实验方法同上38
- 2 统计学处理38
- 3 结果38-41
- 讨论41-44
- 结论44-45
- 创新点45-46
- 参考文献46-50
- 附录50-51
- 文献综述51-72
- 参考文献63-72
- 致谢72-73
- 在校期间主要研究成果73
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 Soundharrajan Ilavenil;Da Hye Kim;Young-Il Jeong;Mariadhas Valan Arasu;Mayakrishnan Vijayakumar;Ponnuraj Nagendra Prabhu;Srisesharam Srigopalram;Ki Choon Choi;;Trigonelline protects the cardiocyte from hydrogen peroxide induced apoptosis in H9c2 cells[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2015年04期
2 周游;李浪;陈绘颖;王江友;刘涛;苏强;;大鼠放射性心脏损伤后肿瘤坏死因子α表达的变化及阿托伐他汀对其的影响[J];中华老年心脑血管病杂志;2014年07期
3 尹航;李兴德;王明;朱中成;赵悦;;丹红注射液预防老年胸部肿瘤患者同步放化疗心脏损伤的临床观察[J];肿瘤防治研究;2014年05期
4 何宏涛;王军;刘青;王yN;龙书敬;程云杰;景绍武;尚凯;曹峰;杨从容;;急性放射性心脏损伤剂量体积因素分析[J];中华肿瘤防治杂志;2014年10期
5 屈强;;黄芪注射液对放射性心脏损伤的保护作用[J];肿瘤基础与临床;2012年04期
6 全逸先;;保护放射工作人员 完善放射性疾病诊疗体系——《放射性心脏损伤诊断》标准解读[J];中国卫生标准管理;2012年02期
7 Shikha Snigdha;Erica D Smith;G Aleph Prieto;Carl W Cotman;;Caspase-3 activation as a bifurcation point between plasticity and cell death[J];Neuroscience Bulletin;2012年01期
8 徐浩;陈可冀;;Integrating Traditional Medicine with Biomedicine Towards a Patient-Centered Healthcare System[J];Chinese Journal of Integrative Medicine;2011年02期
9 李永胜;严丽;雍永权;梁黔生;;丹参酮ⅡA对高血压大鼠肥厚心肌TGF-β_1/Smads信号通路的影响[J];中国中西医结合杂志;2010年05期
10 赵明哲;刘靖华;李玉花;姜勇;;ERK信号通路的信号转导调控机制[J];国际病理科学与临床杂志;2009年01期
，本文编号：823957
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yundongyixue/823957.html
