低氧对肌腱细胞增殖的影响及其机制的初探

发布时间：2017-09-22 15:15

  本文关键词：低氧对肌腱细胞增殖的影响及其机制的初探

  更多相关文章： 低氧 肌腱细胞 体外扩增 细胞凋亡 细胞周期 乳酸

【摘要】：[目的]肌腱细胞是一种用于构建组织工程化肌腱的种子细胞,其构建的肌腱在形态、结构、功能等方面与正常肌腱更加相近。但是由于供区的取材面积较小、肌腱细胞增殖相对缓慢、随代次增加细胞表型功能逐渐丧失等原因,使得分离扩增得到的肌腱细胞在数量和质量上无法良好地满足构建肌腱的需要。有研究表明低氧可以明显促进细胞增殖,因此,本研究拟使用不同的低氧浓度(2%02,5%02,10%02)培养肌腱细胞,从而发现更适宜肌腱细胞增殖的氧浓度：同时还对这些氧浓度培养的肌腱细胞进行凋亡和细胞周期检测,以初步探索低氧促进肌腱细胞增殖是否与调控细胞凋亡或细胞周期有关。在此基础上,本研究还检测了低氧浓度培养的肌腱细胞内乳酸含量,并将肌腱细胞置于含有乳酸的培养液中在常规氧浓度下进行培养,以观察不同浓度的乳酸对肌腱细胞增殖的影响,验证低氧是否可能通过介导乳酸产生从而促进细胞增殖,为今后研究低氧促进细胞增殖的分子机制打下基础。[方法]1.取2%02、5%02、10%02(实验组)和21%02(对照组)培养条件下的P1肌腱细胞接种96孔板,接种后培养8天,每天采用CCK8法检测上述氧浓度对P2肌腱细胞增殖的影响。2.将上述氧浓度培养条件下的P2进行Annexin V FITC/PI双标法染色,以检测P2肌腱细胞凋亡情况。3.对上述氧浓度培养条件下的P2进行DAPI染色,以检测肌腱细胞的细胞周期。4.取21%02培养条件下的P2肌腱细胞接种96孔板,添加不同浓度乳酸(5mmol/L、10mmol/L、15mmoUL、20mmol/L、25mmol/L)并培养7天,每天采用CCK8法检测不同浓度乳酸对P2肌腱细胞增殖的影响。[结果]1.与21%02相比,2%02、5%02能促进P2肌腱细胞增殖,但是10%O2对P2肌腱细胞增殖能力的影响不显著。2.2%O2、5%O2、10%O2、21%O2对P2肌腱细胞的细胞凋亡的影响无显著差异。3.2%O2、5%O2、0%O2、21%O2对P2肌腱细胞的细胞周期的影响无显著差异。4.与不添加乳酸相比,添加5-25mmol/L的L型乳酸对P3肌腱细胞增殖有轻微抑制作用,但该作用无统计学差异。[结论]在2%02-10%02范围内,P2肌腱细胞的增殖能力会随着氧浓度的降低而有所增强,即2%02是最利于肌腱细胞增殖的氧浓度。但是低氧促进肌腱细胞增殖并非通过调控细胞凋亡、细胞周期进行。无氧代谢产物L型乳酸对肌腱细胞增殖并无促进作用。
【关键词】：低氧 肌腱细胞 体外扩增 细胞凋亡 细胞周期 乳酸
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R873
【目录】：

• 缩略词表(以字母顺序排列)6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-14
• 2 不同氧浓度对肌腱细胞体外培养的影响14-32
• 2.1 材料和方法14-18
• 2.2 结果18-27
• 2.2.1 不同氧浓度对肌腱细胞形态的影响18-20
• 2.2.2 不同氧浓度对P_2肌腱细胞增殖的影响20-23
• 2.2.3 不同氧浓度对P_2肌腱细胞凋亡的影响23-26
• 2.2.4 不同氧浓度对P_2肌腱细胞周期的影响26-27
• 2.3 结果讨论与分析27-32
• 3 不同浓度乳酸对肌腱细胞增殖的影响32-40
• 3.1 材料与方法32-35
• 3.2 结果35-37
• 3.2.1 2%O_2培养的P_2肌腱细胞内的乳酸含量35
• 3.2.2 不同浓度乳酸对常规氧浓度(21%O_2)培养的P_3肌腱细胞增殖的影响35-37
• 3.3 结果讨论与分析37-40
• 4 参考文献40-46
• 全文总结46-47
• 附录47-48
• 综述48-65
• 参考文献(References)59-65
• 攻读学位期间获得的学术成果65-66
• 致谢66

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本文编号：901536