牛部分脱蛋白异种骨复合自体红髓在治疗枪伤后骨缺损中的实验研究

发布时间：2017-09-28 10:46

  本文关键词：牛部分脱蛋白异种骨复合自体红髓在治疗枪伤后骨缺损中的实验研究

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【摘要】：临床上在治疗骨缺损尤其是大段、大面积骨缺损时存在着一定困难，因创造出理想适合骨缺损区域骨生成的条件较为困难，治疗不当时往往导致骨不能愈合并最终发生骨不连，其中火器伤性骨缺损由于损伤处软组织损伤、缺如及异物不易清除等问题极易引起感染而导致骨髓炎，治疗起来更加具有挑战性。上世纪20年代，所有知名的战役中，发生的四肢肌肉骨骼损伤的概率为60%[1]，而这些损伤往往是导致永久性残疾发生的重要因素[2]，针对骨缺损，目前治疗的主要方法是进行自体骨移植，但当出现大面积骨缺损时往往存在来源不足等问题，组织工程骨的出现为火器伤性骨缺损的治疗开辟了新的道路，其中心内容围绕着种子细胞，细胞载体及成骨因子三方面展开，尽管目前有很多相关研究，但还未有任何一种理想状态下的可与自体骨移植相媲美的人工骨出现，而在治疗火器伤性骨缺损时，由于损伤的特殊性，则对骨移植材料要求更为苛刻，因此开发出合适的人工骨移植材料是目前研究的主要任务，本实验用物理化学结合的方法制备的部分脱蛋白小牛异种骨作为移植支架，复合羊自体红髓构建骨组织工程移植材料来修复绵羊胫骨中段临界骨缺损，观察成骨能力和免疫排斥反情况，并对火器伤骨缺损处是否能进行一期植骨进行讨论，为火器性骨缺损的治疗提供治疗的替代方法和实验依据。 目的 利用羊胫骨枪伤骨缺损模型，探讨异种牛部分脱蛋白骨复合自体红髓作为骨组织工程移植材料的促骨生成能力及火器伤后骨缺损处是否能进行一期植骨等问题，为火器伤骨缺损的早期治疗提供新的理论依据和方法。 方法 （1）将小牛骨切割成合适大小的骨条，参考文献中的方法制备部分脱蛋白小牛异种骨，并用Co60照射后放入－80℃超低温冰箱冷冻保存，用HE染色在光镜下观察骨支架中的脱细胞祛抗原情况，并用扫描电镜观察并测定材料的孔径大小和孔隙率。 （2）新疆细毛羊24只，雌雄不限，按随机数字表分为A，B，C，D四个组，每组6只，用初速度为320m/s的7.7式手枪在每只羊的右侧胫骨中段造成贯通伤，伤后6小时内完成清创并于术中制造出平均长度为2.5cm的骨缺损，在缺损处行一期植骨内固定，，其中A组缺损处植入自体骨（自体骨组），B组植入羊自体红骨髓复合异种牛部分脱蛋白骨（支架复合红髓组），C组单纯植入异种牛部分脱蛋白骨（单纯异种骨组），D组缺损区什么都不植（空白对照组），前三组为实验组，最后一组为对照组，术后观察实验羊的术后活动情况及生命体征的变化，术后一周应用抗生素预防感染并测量记录肛温变化。 （3）于术后4、8、12、16周对各组绵羊行X片拍摄，最后一次拍摄于处死羊后进行，观察缺损处骨痂的生长情况，于16周时处死绵羊取患肢胫骨进行大体观察、组织学检查、MicroCT骨密度检查及骨密度等检测分析。 结果 （1）新制备的部分脱蛋白小牛异种骨支架长约2.5cm，肉眼观呈白色蜂窝状，无软组织及异物残留，光镜下观察骨小梁完整，小梁中的大部分骨细胞消失，原细胞存在部位呈空泡状，少量细胞存留但核固缩坏死，失去活性。电镜下观察该材料具有天然的孔状结构，各孔之间互通性良好，用软件测量材料的孔隙率接近80%。 （2）实验组术后3天患肢可落地，但不可承重，2周后可部分负重，但仍跛行，4周后可正常活动，空白组羊16周中始终跛行。术后观察患肢术区切口恢复良好，共有3例发生感染，清创后发现手术切口内橡皮引流片残留，将此3只羊剔除实验组并重新选3只入组未有感染发生。 （3）术后16周空白对照组骨缺损处未成功修复，有些有少量骨痂生成考虑术中骨膜未清除干净所致，实验组X线、骨密度、生物力学和组织学检查结果显示，A组＞B组＞C组＞D组，其中A组与B组比较无明显统计学差异(P＞0.05)，A、B组与C、D组间的差异具有统计学意义(P＜0.05)。 结论 （1）本实验所制备的异种牛骨支架孔隙率好，免疫原性低，细胞等抗原类物质清除的较为干净。植入后自体红髓复合牛异种部分脱蛋白骨的成骨效果与自体骨移植效果相近，且来源广泛，价格低廉，因此，此种复合材料可以当做较为理想的组织工程材料。 （2）在所有的实验动物中，并未出现明显的缺损区感染现象，证明枪伤后一期植骨并进行骨折内固定在动物实验中是可行的，但真正应用于人还需进一步的临床实验加以证明。
【关键词】：火器伤 自体红髓 异种牛脱蛋白骨 骨缺损 骨组织工程
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R826.5
【目录】：

• 缩略语表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 文献回顾12-17
• 1 种子细胞的研究进展12-13
• 2 支架材料的应用13-15
• 3 成骨因子的研究15-16
• 4 火器伤骨缺损的特殊性及研究治疗进展16-17
• 1 材料17-18
• 1.1 原材料17-18
• 1.2 主要实验仪器18
• 1.3 常规试剂18
• 2 方法18-22
• 2.1 异种牛部分脱蛋白松质骨条的制备18-19
• 2.2 实验动物的分组19-20
• 2.3 羊右后胫骨枪伤模型的建立20
• 2.4 观测指标20-22
• 2.5 统计学分析22
• 3 结果22-26
• 3.1 异种骨支架的形态学观察22-23
• 3.2 术后实验羊的一般情况观察23-24
• 3.3 X 线检查结果24
• 3.4 生物力学测试结果24-25
• 3.5 骨密度测试结果25
• 3.6 大体及组织学观察结果25-26
• 4 讨论26-36
• 4.1 牛异种骨作为组织工程支架材料移植的可行性26-28
• 4.2 异种骨移植物的制作方法的选择28-30
• 4.3 自体红髓作为种子细胞的成骨作用评价30-31
• 4.4 自体红骨髓复合牛异种骨对枪伤性骨缺损的一期植骨修复作用31-36
• 小结36-37
• 参考文献37-42
• 附录42-51
• 个人简历和研究成果51-52
• 致谢52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 谢利娜;潘巨利;;骨生长因子的研究进展[J];北京口腔医学;2009年02期

2 张进军,孙鲲;四肢爆炸伤临床救治的研究进展[J];创伤外科杂志;1999年01期

3 王建忠;李兵仓;陈菁;陈志强;;携带HVEGF_(121)-EGFP融合基因的腺病毒表达载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达[J];第三军医大学学报;2006年04期

4 邓江;黄文良;阮世强;苑成;佘荣峰;;胰岛素样生长因子-Ⅰ活化组织工程骨修复骨缺损的实验研究[J];第三军医大学学报;2011年02期

5 周红波;朱智敏;;甲壳素及其衍生物用于骨缺损修复的研究进展[J];国际口腔医学杂志;2011年01期

6 王大志,杨兰,罗毅,黄允兰,张万群,汤洪高,王会信,刘凯,陶菁;猪骨羟基磷灰石的结构稳定性[J];生物物理学报;1998年04期

7 邢自宝;刘永刚;苏佳灿;;骨缺损修复研究进展[J];临床医学工程;2010年02期

8 赵自平;吴少坚;欧宣成;那晓东;;超声脱细胞异种松质骨材料的制备及性能检测[J];中国医学工程;2009年05期

9 唐昭惠;诸黎星;徐土炳;王凯;周新民;李强;;自体红骨髓注射治疗骨不连术后局灶性骨缺损[J];中国骨伤;2009年07期

10 杨志明,余希杰,解慧琪,陈旭,屈艺;不同来源成骨细胞生物学特性的比较研究[J];中华创伤杂志;2001年01期

本文编号：935439