脂肪干细胞对大鼠放射性肠炎的修复作用

发布时间：2017-10-02 14:06

  本文关键词：脂肪干细胞对大鼠放射性肠炎的修复作用

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【摘要】：放射是治疗腹盆部恶性肿瘤的主要手段之一,但放射在杀死肿瘤的同时,对腹部的肠道也有损伤。脂肪来源的干细胞具有分化和免疫调节能力,可修复组织器官。它来源广泛、取材方便、体外易于大规模培养,具有良好的应用前景。本课题采用大鼠的脂肪干细胞,研究对大鼠放射性肠炎的修复作用。建立了脂肪干细胞的制备方法,细胞贴壁生长,呈纺锤形。P6代脂肪干细胞生长旺盛,形态稳定,具有成脂肪、成骨,成软骨三向分化能力。强烈表达间充质细胞表型,具有较低免疫原性,可用于治疗细胞。采用X线,总剂量15Gy,对成年近交系SD大鼠进行照射处理,大鼠腹泻和便血阳性率在7d达到100%,肠道病理变化符合放射性肠炎的典型特征,建立了放射性肠炎大鼠模型,给予大鼠脂肪干细胞腹腔注射,剂量为1×107个细胞/只,未治疗组6d后腹泻和便血阳性率一直保持100%,而治疗组14d后这个数值为20%。未治疗组的生存中位时间为16d,而治疗组是40d。结果显示,脂肪干细胞改善放射性肠炎大鼠的精神状态,减少放射性肠炎模型大鼠腹泻和便血次数,增加饮食量,增加大鼠体重和延长其生存时间。取治疗组和未治疗组的外周血及肠道标本进行病理学观察,结果显示,脂肪干细胞受微环境影响能趋化至损伤部位,可分化为血管内皮细胞,增加肠道组织血管内皮细胞的数目。脂肪干细胞能提高放射性肠炎大鼠血清中抗炎因子IL-10的分泌量,具有抗炎和免疫系统调节作用。脂肪干细胞可减少放射性肠炎大鼠的肠上皮层炎症浸润,在炎症发展的过程当中起到了抗炎和抑制炎症发展的作用。脂肪干细胞可减少肠壁的胶原沉积,抑制纤维化的形成。脂肪干细胞可修复肠道绒毛形态和长度增加,进而达到恢复肠道组织上皮形态及功能。
【关键词】：放射性肠炎 脂肪干细胞 损伤修复 抗炎 免疫调节
【学位授予单位】：天津大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R730.55
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-11
• 第一章 文献综述11-19
• 1.1 放射性肠炎11-12
• 1.1.1 表现与危害11
• 1.1.2 发病机制11-12
• 1.1.2.1 血管内皮细胞的破坏11-12
• 1.1.2.2 肠干细胞的破坏12
• 1.2 放射性肠炎的治疗现状12-13
• 1.2.1 药物治疗12-13
• 1.2.2 手术治疗13
• 1.2.3 细胞因子治疗13
• 1.2.4 间充质干细胞治疗13
• 1.3 脂肪干细胞的特性13-16
• 1.3.1 脂肪干细胞来源13-14
• 1.3.2 分化能力14
• 1.3.3 免疫调节14
• 1.3.4 修复组织器官14-15
• 1.3.5 趋化性15-16
• 1.3.6 应用16
• 1.4 脂肪干细胞修复放射性肠炎优势16-17
• 1.4.1 脂肪干细胞的抗炎及免疫调节能力较强16
• 1.4.2 自体细胞治疗安全性高16-17
• 1.4.3 脂肪干细胞来源广泛17
• 1.5 选题背景和研究内容17-19
• 1.5.1 选题背景17-18
• 1.5.2 主要研究内容18-19
• 第二章 脂肪干细胞的制备及其对大鼠放射性肠炎的疗效19-35
• 2.1 实验材料与方法19-25
• 2.1.1 实验动物19
• 2.1.2 主要试剂与配制19-20
• 2.1.2.1 主要试剂19-20
• 2.1.2.2 溶液配制20
• 2.1.3 实验仪器及耗材20-21
• 2.1.4 动物分组21-22
• 2.1.4.1 脂肪干细胞的获取21
• 2.1.4.2 大鼠放射性肠炎造模鉴定21
• 2.1.4.3 脂肪干细胞剂量确定21
• 2.1.4.4 脂肪干细胞对大鼠放射性肠炎的治疗试验21-22
• 2.1.5 鼠源脂肪干细胞的制备方法22-23
• 2.1.5.1 鼠源脂肪干细胞的分离培养22-23
• 2.1.5.2 脂肪干细胞的表型鉴定方法23
• 2.1.5.3 脂肪干细胞的分化鉴定方法23
• 2.1.6 放射性肠炎模型大鼠23-24
• 2.1.6.1 放射性肠炎模型大鼠处理23-24
• 2.1.6.2 放射性肠炎模型大鼠的鉴定24
• 2.1.7 脂肪干细胞剂量确定24-25
• 2.1.8 脂肪干细胞对大鼠放射性肠炎的疗效25
• 2.1.8.1 大鼠一般生存状态25
• 2.1.8.2 大鼠的肠道组织变化25
• 2.2 结果与讨论25-34
• 2.2.1 脂肪干细胞的特征25-27
• 2.2.1.1 鼠源脂肪干细胞基本形态25-26
• 2.2.1.2 P3代脂肪干细胞的表型26-27
• 2.2.1.3 P3代脂肪干细胞的分化能力27
• 2.2.2 放射性肠炎的模型鉴定27-29
• 2.2.2.1 一般生存状态表现27-28
• 2.2.2.2 解剖肠道组织观察病变表现28-29
• 2.2.3 脂肪干细胞的剂量效应29-31
• 2.2.4 脂肪干细胞对大鼠放射性肠炎的疗效31-34
• 2.2.4.1 脂肪干细胞对放射性肠炎大鼠的生存状态影响31-33
• 2.2.4.2 大鼠肠道组织的变化33-34
• 2.3 小结34-35
• 第三章 脂肪干细胞对大鼠放射性肠炎的修复作用35-54
• 3.1 材料与方法35-43
• 3.1.1 实验动物35
• 3.1.2 主要试剂与制备35-36
• 3.1.2.1 主要试剂35-36
• 3.1.2.2 溶液配制36
• 3.1.3 实验仪器与耗材36-37
• 3.1.4 鼠源脂肪干细胞的培养与鉴定37-38
• 3.1.4.1 脂肪干细胞的复苏传代37
• 3.1.4.2 脂肪干细胞的表型鉴定与分化鉴定37-38
• 3.1.5 实验动物分组与标本制备38
• 3.1.5.1 脂肪干细胞趋化性分组38
• 3.1.5.2 脂肪干细胞对大鼠放射性肠炎的修复作用分组38
• 3.1.5.3 大鼠的处死和标本获取38
• 3.1.6 脂肪干细胞趋化性测定38-39
• 3.1.7 大鼠血液中IL-10含量测定39-40
• 3.1.8 HE染色观察炎症细胞浸润40-41
• 3.1.9 Masson染色观察胶原沉积41-42
• 3.1.10 HE染色观察肠绒毛42
• 3.1.11 免疫荧光观察血管新生42-43
• 3.2 结果与分析43-51
• 3.2.1 P6代脂肪干细胞鉴定结果43-44
• 3.2.1.1 P6代脂肪干细胞形态43
• 3.2.1.2 P6代脂肪干细胞细胞表型43
• 3.2.1.3 P6代脂肪干细胞的分化能力43-44
• 3.2.2 脂肪干细胞的趋化能力44-45
• 3.2.3 两组大鼠肠组织标本45-46
• 3.2.4 对外周血IL-10表达量的影响46-47
• 3.2.5 对肠道组织炎症浸润的影响47-48
• 3.2.6 对肠道组织胶原沉积的影响48-49
• 3.2.7 对肠道组织绒毛的影响49-50
• 3.2.8 对肠道组织血管内皮细胞的影响50-51
• 3.3 讨论51-53
• 3.4 小结53-54
• 第四章 结论与展望54-56
• 4.1 本文结论54-55
• 4.2 展望55-56
• 发表论文和参加科研情况说明56-57
• 参考文献57-61
• 附录61-62
• 致谢62-63

【参考文献】

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本文编号：959994