谷氨酸脱羧酶在急性脑型氧中毒中的快速变化

发布时间：2017-12-23 12:41

  本文关键词：谷氨酸脱羧酶在急性脑型氧中毒中的快速变化　出处：《青岛大学》2005年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：高压氧在医学中的应用越来越广泛,但是在特殊的环境下,例如在氧饱和潜水发生事故时可导致急性脑型氧中毒,发生氧惊厥。对氧惊厥发病机制目前较为公认的有以下几种假说:脑血流量改变学说,氧自由基学说,酶抑制学说,氨基酸递质失衡学说,但确切机制至今尚无定论。γ-氨基丁酸(GABA)是脑内的主要抑制性神经递质,而谷氨酸脱羧酶(GAD)是GABA合成过程中的关键酶。在所有产生或降解神经递质的酶中,GAD是迄今为止发现的高分压氧暴露时活性受抑制最明显的酶,所以研究GAD的变化对阐明氧中毒的发生机制具有特殊的意义。有试验证实,体外高分压氧暴露会造成GAD活性降低。为了在细胞和分子层面系统性的研究GAD在氧惊厥的发生发展中的变化及其意义,我们建立了原代海马神经元培养方法,进行了一系列的试验: 1.培养新生SD大鼠海马神经元,观察一定时程的高分压氧对海马神经元的形态学损害。 2.采用不同的高压氧暴露方案,采用5ATA高压氧;120分钟,及采用微量液体,10,20,30分钟,分别检测即刻和24小时后的细胞存活率(MTT比色法)。 3.检测高压氧暴露前后神经元内GAD含量的变化。(采用Western Blotting和免疫荧光的方法);同时检测高压氧暴露成年SD大鼠海马区GAD含量的变化(采用Western Blotting的方法),并分型检测。 4.检测高压氧暴露前后神经元内GAD mRNA表达的变化(采用rtPCR的方法)。 5.检测高压氧暴露前后神经元内GAD活性的变化(采用HPLC法)。 6.检测高压氧暴露前后神经元内外GABA的变化(采用HPLC法)。 我们的试验结果如下: 1.一定压力时程的高压氧暴露可导致神经元形态学损伤。 2.分别检测高压氧暴露后即刻和24小时后的细胞存活率(MTT比色法)。结果在即刻组均无存活率降低,而24h组细胞存活率下降。 3.高压氧暴露后,神经元内的GAD含量降低。使用分别抗GAD65、GAD67的单抗发现随高压氧暴露发生变化的是GAD67。动物试验证明高压氧暴露SD大鼠海马区GAD67含量有所变化,在惊厥发作前升高到一个峰值,随后降低,惊厥发作后约降至正常水平。 4.GAD67 mRNA表达明显增多,与此同时检测GAD65 mRNA无明显变化。 5.GAD活性在10,20,30分钟组有一个先升高,后降至正常的趋势。在2h组GAD活性降低至约正常的50%左右。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R84

【参考文献】

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本文编号：1323921