白藜芦醇立方液晶纳米粒的制备及其抗肿瘤作用研究

发布时间：2016-10-10 14:58

  本文关键词：白藜芦醇立方液晶纳米粒的制备及其抗肿瘤作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

《兰州大学》 2015年

白藜芦醇立方液晶纳米粒的制备及其抗肿瘤作用研究

李琳  

【摘要】：目的:制备白藜芦醇立方液晶纳米粒(resveratrol liquid crystalline nanoparticles,RES-LCNPs),对制备工艺及处方进行筛选优化,对优化的RES-LCNPs观察了形态,测定了粒径、Zeta电位及DL和EE,考察了稳定性,评价了RES-LCNPs体外释药特性及机理,并研究了优化的RES-LCNPs对体外培养的人肝癌细胞株(HepG2)和肺癌细胞株(A549)的诱导凋亡作用。方法:1.在预实验基础上,采用Bottom-up法制备RES-LCNPs,通过单因素实验对制备工艺如搅拌速度、分散时间、超声功率及处方因素包括稳定剂种类、稳定剂用量、脂质材料单油酸甘油酸酯(glyceryl monooleate,GMO)用量、投药量、水相体积进行筛选。选择对RES-LCNPs影响较大的因素(GMO﹕RES、RES浓度、稳定剂浓度),采用效应面-中心复合设计(response surface methodology-central composite design,RSM-CCD)法以载药量、包封率及稳定性常数的总评归一值(D)为响应值对处方进一步优化。2.通过透射电子显微镜观察优化的RES-LCNPs形态;应用激光粒度分析仪测定粒径及zeta电位;对其DL和EE进行了测定;用差示扫描量热法(Differential scanning calorimetry,DSC)鉴定RES是否被立方液晶纳米粒子包封;考察了RES-LCNPs在4℃及25℃条件下的贮存稳定性,并对其冻干粉在4℃条件下的稳定性进行了考察;以1.5%的十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)溶液为释放介质,采用平衡透析法评价RES-LCNPs体外释药特性,并对其体外药物释放机制进行拟合。3.采用MTT法检测优化的RES-LCNPs对HepG2、A549细胞增殖的影响,用光学显微镜及荧光显微镜观察其诱导细胞形态的变化,流式细胞仪(Flow cytometry,FCM)检测细胞周期变化及细胞凋亡情况,Western blotting法检测肿瘤细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)的表达情况。结果:1.通过单因素实验筛选的制备工艺为:搅拌速度1000 rmp,分散时间2 h,超声功率150 W;筛选的最佳稳定剂为聚乙烯醇15000(polyving akohol,PVA)。采用RSM法优化所得最优处方为GMO︰RES浓度比21.7:1、RES浓度0.4 g/L、PVA浓度0.91 g/L。因变量的理论预测D值为0.592,实测D值为0.584±0.007,偏差为1.35%。2.优化的RES-LCNPs形态圆整、大小均匀、无粘连,平均粒径为50.77±5.14nm,多分散指数(polydispersity index,PDI)为0.249±0.063,zeta电位为-22.6±1.9 mV,DL和EE分别为4.21%、92.77%。DSC分析表明RES被纳米粒子包裹。RES-LCNPs在25℃条件下,第21 d出现少量絮状沉淀,4℃条件下,第50 d出现少量沉淀,说明RES-LCNPs在4℃条件下稳定性好,RES-LCNPs冻干粉放置90 d载药量、包封率、平均粒径的变化很小,说明RES-LCNPs冻干粉具有好的稳定性。RES-LCNPs释放8 h,RES的累积释放率为66.62%,释放36 h,RES的累积释放率为80.76%,体外释放结果表明其体外释药缓慢,且释放机制符合Weibull方程,回归方程为lnln[1/(1-Q)]=0.609lnt-1.4202(r=0.9816)。3.浓度为10μM、20μM、40μM、80μM的RES-LCNPs作用于HepG2和A549细胞24 h,随着药物浓度增加,抑制率升高。40μM RES-LCNPs分别作用于HepG2和A549细胞6 h、12 h、24 h、48 h,随着作用时间延长,细胞抑制率上升。RES-LCNPs处理的HepG2和A549细胞,与RES溶液组相比,光学显微镜下细胞数量少、折光度低、分布松散,荧光显微镜观察可见亮蓝色荧光,且染色质固缩、胞核聚集。FCM检测表明,40μM RES-LCNPs作用于HepG2和A549细胞24 h,细胞阻滞趋向G2/M期,且早晚期凋亡明显。WB结果显示,RES-LCNPs能促进Bax表达、抑制Bcl-2的表达,具有诱导癌细胞凋亡的作用。结论:优化的RES-LCNPs制备工艺可行、处方合理,形态圆整、无粘连、分布均匀、粒径小,其冻干粉稳定性良好,并具有明显的缓释作用。RES-LCNPs作用于HepG2和A549细胞呈剂量、时间依赖性,且抑制及诱导细胞凋亡作用较RES溶液强,细胞阻滞趋向G2/M期,诱导细胞凋亡机制可能与促进Bax表达、抑制Bcl-2的表达有关。

【关键词】：
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943;R96
【目录】：

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