羟基喜树碱磁性热敏脂质体肿瘤局部药动学研究

发布时间：2016-12-05 20:02

  本文关键词：羟基喜树碱磁性热敏脂质体肿瘤局部药动学研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《广州中医药大学》 2012年

羟基喜树碱磁性热敏脂质体肿瘤局部药动学研究

谢毅  

【摘要】：1目的 课题建立昆明鼠H22肝癌皮下肿瘤动物模型,以微透析技术为采样方法,对自行研制的羟基喜树碱磁性热敏脂质体制剂进行肿瘤局部药动学研究,以评价自制]HCPT磁性热敏脂质体在肿瘤局部的靶向聚集性和释药性,为今后进一步开展高强度聚焦超声(HIFU)与热敏脂质体联用的肿瘤治疗及制剂技术研究奠定理论基础。本课题通过系统、全面的研究,建立了以微透析技术为核心的肿瘤局部药动学研究方法,弥补了经典药动学在肿瘤靶向制剂研究方面的不足,为今后该领域的研究奠定基础。 2方法 本课题研究主要分为以下四大部分： 2.1HCPT分析方法的建立 采用HPLC-UV同时测定开环和闭环羟基喜树碱的含量,对色谱条件进行了考察,包括流动相优化、标准曲线绘制、线性范围考察、精密度试验、定量限及检测限测定等。 2.2HCPT微透析取样方法建立 分别考察了灌流流速、媒介浓度、温度等因素对开环、闭环HCPT回收率测定的影响；进行了HCPT回收率变化特性研究,包括回收率的体内外日内稳定性,开、闭环HCPT混合回收率变化情况等研究；内标法测定HCPT体内回收率的可行性研究 2.3羟基喜树碱体内整体药动学研究 采用微透析技术进行HCPT体外血浆蛋白结合率测定；比较了市售羟基喜树碱注射液尾静脉和腹腔注射给药的药动学过程；研究了自制HCPT磁性热敏脂质体大鼠体内药动学过程；反透析法测定体内回收率,绘制相关药时曲线,采用DAS2.1.1统计软件处理药时数据。 2.4自制羟基喜树碱磁性热敏脂质体肿瘤局部药动学研究 建立昆明小鼠H22肝癌细胞皮下肿瘤模型；同心圆探针植入皮下肿瘤模型进行肿瘤局部药动学过程,药动学实验分三组：A组为自制HCPT磁性热敏脂质体外加磁场组,B组为自制HCPT磁性热敏脂质体不加磁场组,C组为市售HCPT注射液外加磁场组,灌流流速2μL·min-1,反透析法测定体内回收率,绘制相关药时曲线,采用DAS2.1.1和SPASS18.0统计软件处理药时数据。 3结果 3.1HCPT检测方法建立课题建立了以HPLC-UV同时检测开环、闭环HCPT的方法。分析方法如下：Waters高效液相色谱系统：Waters515泵,2487双波长紫外检测器,浙大N3000色谱工作站；色谱柱：Phenomenex Luna C18(2)(4.6mm×250mm,5μm)柱;保护柱:Phenomenex保护柱；流动相：乙腈-甲醇-0.05mol·L-1KH2PO4(NaOH调pH6.4)(60：490：450)；流速：0.8mL-min-1;检测波长：384nm；柱温：25℃；柱压：120bar。 在此色谱条件下,HCPT开、闭环峰形对称,出峰时间分别为4.48、7.62min,且杂质分离度良好,线性范围及定量限、检测限等符合实验要求。 3.2HCPT微透析取样方法建立 确定了HCPT体内微透析取样参数：灌流流速2μL·min-1,取样量12μL,取样间隔6min,反透析法测定回收率。 HCPT开环、闭环混合回收率变化情况研究结果：增量法和减量法下开环、闭环HCPT回收率在各流速下保持一致,这为反透析法测定体内回收率可行性提供了实验依据；开环、闭环HCPT探针回收率不随浓度变化；在同一流速下闭环HCPT回收率比单纯闭环HCPT时下降明显,开环HCPT回收率比单纯开环HCPT时未见明显下降,说明开、闭环HCPT同时存在时,闭环HCPT会受开环HCPT影响导致回收率下降。 开环、闭环HCPT体外回收率在8小时内保持稳定,RSD分别为5.12%、5.99%；体内回收率在8小时内基本保持稳定,RSD分别为7.88%、8.68%。通过体外和体内研究表明,内标物与HCPT回收率比值P具有不稳定性,从而不能准确地求出探针周围药物浓度的变化,内标法测定回收率可行性不高。 3.3羟基喜树碱体内整体药动学研究 反透析法测定HCPT体外血浆蛋白结合率达72%; 血液微透析研究表明：以10mg/kg给药剂量,市售羟基喜树碱注射液尾静脉和腹腔给药后药动学参数均符合二房室开放模型,腹腔给药有一个短暂的吸收过程;尾静脉给药的α、β相半衰期、Tmax、MRT(0-∞)值远小于腹腔给药途径,说明尾静脉给药后HCPT快速地分布消除,腹腔途径相对较慢,药物滞留时间相对较长；尾静脉组的Cmax值是腹腔组的13.3倍,AUC(0-∞)值前者是后者的4.3倍,说明尾静脉给药途径能显著提高HCPT血药浓度和生物利用度。 自制羟基喜树碱磁性热敏脂质体尾静脉给药后,大大增加闭环血药浓度；和市售羟基喜树碱注射液相比,二者的药动学参数均符合二房室开放模型,自制剂型的α、β相半衰期、Tmax、MRT(0-∞)值分别是市售剂型的11.1、2.2、4、3.5倍,说明自制磁性热敏脂质体尾静脉给药后,HCPT分布消除速度慢,滞留时间比市售剂型长；自制剂型的Cmax值是市售剂型的0.6倍,AUC(0-∞)值前者是后者的1.4倍,说明与市售剂型相比,自制剂型尾静脉给药能提高药物的生物利用度,同时降低药物血液达峰浓度,降低药物的毒性。 3.4自制羟基喜树碱磁性热敏脂质体肿瘤局部药动学研究 A、B、C三组HCPT在肿瘤局部药动学分布过程均符合二房室开放模型,三组Tmax依次为6,12,18min,与B、C两组相比自制HCPT磁性脂质体在外加磁场引导下能在短时间内快速地聚集到肿瘤局部释放药物；A、B、C三组AUC(0-∞)值两两之间均有统计学差异(Sig.0.05),三组Cmax值两两之间均有统计学差异(Sig.0.05),说明自制磁性热敏脂质体在外加磁场的引导下,能显著地提高肿瘤局部的药物浓度,靶向聚集性和释药性高。 4结论 4.1采用HPLC-UV能分离开环、闭环HCPT,系统的最低检测限量能够满足本研究中可能达到的最低浓度。 4.2HCPT开环、闭环混合时,闭环HCPT回收率会下降,开环回收率变化不大,但两者透析特性均不发生改变。 4.3HCPT内酯环结构特殊,未寻找到合适内标物使二者回收率比值P稳定,内标法测定回收率可行性不高。 4.4用反透析法测定的HCPT大鼠血浆蛋白结合率与传统法研究的结果吻合,验证了微透析进行HCPT体内药动学研究的可行性。 4.5自制HCPT磁性热敏脂质体血液药动学研究结果表明,自制剂型能很好地保护HCPT内酯结构,提高血液闭环比例。 4.6昆明小鼠H22肝癌细胞皮下肿瘤模型成模周期短,成瘤率高,适合微透析研究进行肿瘤局部药动学研究。 4.7自制的HCPT磁性热敏脂质体在外加磁场和肿瘤局部高温(≥43℃)的条件下,能迅速地聚集到靶部位,快速地释放包封的药物,肿瘤靶向性高。 4.8本课题建立了以微透析技术为基础的抗肿瘤药物靶向给药系统肿瘤局部药动学研究的一般研究方法,为今后肿瘤局部药动学研究奠定基础。

【关键词】：
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R96
【目录】：

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