膦甲酸钠对硫酸头孢噻利在大鼠体内药动学的影响

发布时间：2017-04-08 16:04

本文关键词：膦甲酸钠对硫酸头孢噻利在大鼠体内药动学的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:建立大鼠血浆中硫酸头孢噻利的HPLC测定方法;考察膦甲酸钠与硫酸头孢噻利合用后,硫酸头孢噻利药动学参数的变化,从而确定膦甲酸钠对硫酸头孢噻利在大鼠体内是否存在影响。方法:(1)色谱条件:色谱柱:Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);检测器:Waters 2489 UV监测器;检测波长:254 nm;柱温:30℃;流动相:乙腈-水(12:88,V/V);流速:1.0 ml·min-1;进样量:20μl;内标:甲硝唑。(2)血浆样品处理:取血浆样品200μl,加入内标溶液20μl混匀,加4%高氯酸200μl,涡旋,离心。取上清液150μl,加入纯净水600μl稀释混匀,20μl进样。(3)标准曲线的制备:配置浓度为5,10,25,50,100,200,400,800,1600,2000 mg·L-1的硫酸头孢噻利模拟血浆样品,并将其分为标准曲线Ⅰ组(5~100 mg·L-1)和标准曲线Ⅱ组(100~2000 mg·L-1),按血浆样品处理方法处理后进样。以硫酸头孢噻利与内标峰面积的比值(Y)对血浆药物浓度(X)进行线性回归,得标准曲线方程Ⅰ和标准曲线方程II。(4)回收率:分别制备标准曲线Ⅰ低(10mg·L-1)、中(40 mg·L-1)、高(80 mg·L-1)和标准曲线Ⅱ低(200 mg·L-1)、中(800 mg·L-1)、高(1600 mg·L-1)6种浓度硫酸头孢噻利模拟血浆样品,按血浆样品处理方法处理后进样,硫酸头孢噻利的峰面积与等量硫酸头孢噻利对照品溶液直接进样的峰面积比值即为硫酸头孢噻利的绝对回收率;内标峰面积与等量甲硝唑内标溶液直接进样的峰面积比值即为内标绝对回收率;根据标准曲线方程计算测得浓度与理论浓度的比值即为相对回收率。(5)精密度:分别制备标准曲线Ⅰ低(10 mg·L-1)、中(40 mg·L-1)、高(80 mg·L-1)和标准曲线Ⅱ低(200 mg·L-1)、中(800 mg·L-1)、高(1600mg·L-1)6种浓度硫酸头孢噻利模拟血浆样品,分别于一日内不同时间处理并测定,计算日内精密度;连续5天处理并测定,计算日间精密度。(6)稳定性:分别制备制备40 mg·L-1和800 mg·L-1的硫酸头孢噻利模拟血浆样品,按血浆样品处理方法处理后分别于0、1、2、3、4 h测定,考察处理后血浆样品室温放置稳定性;即刻处理或反复冻融3次处理后,分别测定,考察血浆样品反复冻融稳定性;即刻处理或于-40℃低温保存5天后处理,分别测定,考察硫酸头孢噻利血浆样品低温保存稳定性。(7)药动学实验:健康Wistar大鼠40只,随机分为对照组和实验组,每组20只。对照组尾静脉注射硫酸头孢噻利200 mg·kg-1,实验组尾静脉注射膦甲酸钠360 mg·kg-1后,即刻注射硫酸头孢噻利200 mg·kg-1。分别于给药后0 min、5 min、15 min、30 min、45 min、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、6 h眼内眦取血,分离血浆,-40℃低温保存。(8)药动学分析:血浆样品处理后,应用HPLC法测定,根据标准曲线计算硫酸头孢噻利的血药浓度,DAS2.1.1软件拟合,计算药动学参数。采用SPSS 13.1软件进行统计学分析。结果:(1)硫酸头孢噻利和内标的保留时间分别为为6.3 min,和11.4min,血浆内源性杂质不干扰测定。(2)标准曲线Ⅰ:Y=0.0030X-0.0012(r=0.9994),线性范围5~100 mg·L-1,标准曲线Ⅱ:Y=0.0031X+0.023(r=0.9997),线性范围100~2000 mg·L-1。(3)回收率:标准曲线Ⅰ低(10mg·L-1)、中(40 mg·L-1)、高(80 mg·L-1)三种模拟血浆样品的绝对回收率分别是(96.07±2.10)%,(86.69±2.90)%和(85.46±5.26)%;标准曲线Ⅱ低(200 mg·L-1)、中(800 mg·L-1)、高(1600 mg·L-1)三种模拟血浆样品的绝对回收率分别是(82.70±2.10)%,(89.30±1.63)%和(97.05±0.46)%。内标甲硝唑的绝对回收率为(80.33±2.85)%。标准曲线Ⅰ的相对回收率分别是(108.64±2.08)%,(101.04±2.36)%和(100.48±3.88)%;标准曲线Ⅱ的相对回收率分别是(91.37±2.43)%,(99.77±2.03)%和(98.85±0.57)%。(4)精密度:标准曲线Ⅰ日内精密度RSD分别为2.07%,2.33%和3.86%;标准曲线Ⅱ日内精密度RSD分别为2.66%,1.48%和0.58%。标准曲线Ⅰ的日间精密度RSD分别为4.61%,2.65%和3.53%;标准曲线Ⅱ的日间精密度RSD分别为2.90%,0.59%和0.33%。(5)稳定性:硫酸头孢噻利血浆样品-40℃保存5天及反复冻融3次后性质稳定,处理血浆样品放置4 h对测定无影响;(6)大鼠静脉注射200 mg·kg-1硫酸头孢噻利后,实验组和对照组主要药动学参数:t1/2分别为(1.56±0.41)h和(1.20±0.49)h,Cmax分别为(1314.4±196.7)mg·L-1和(1470.2±321.4)mg·L-1,AUC0-t分别为(853.6±187.4)mg·h·L-1和(751.3±187.7)mg·h·L-1,AUC0-∞分别为(874.8±212.3)mg·h·L-1和(780.9±199.0)mg·h·L-1,V分别为(0.52±0.13)L·kg-1和(0.45±0.16)L·kg-1,CL分别为(0.24±0.05)L·h-1·kg-1和(0.27±0.07)L·h-1·kg-1。结论:本实验所建立HPLC测定方法简便、准确、灵敏度高、重现性好,硫酸头孢噻利与内标分离良好,血浆内源性杂质对测定无干扰;血浆样品低温保存或反复冻融对测定无干扰;室温放置4 h内稳定。适用于大鼠血浆中硫酸头孢噻利浓度的测定。合用膦甲酸钠前后,硫酸头孢噻利的AUC0-t、AUC0-∞、Cmax、V和CL无显著性变化(P0.05),t1/2有显著性变化(P0.05),硫酸头孢噻利有排泄减缓的趋势,具体机制有待进一步研究。
【关键词】：硫酸头孢噻利 膦甲酸钠 药动学 大鼠 HPLC
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
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