违禁添加降压、降糖类药物化学发光免疫分析方法的建立

发布时间：2017-04-13 13:20

  本文关键词：违禁添加降压、降糖类药物化学发光免疫分析方法的建立，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：在保健品中曝光的违禁添加药物逐渐增多,由于高血压、糖尿病患者数量巨大,不法商贩将过量的速效降压、降糖药物添加到保健品中,长期不合理的服用这类化学药物会导致严重的不良后果,甚至危及生命,因此有必要开发出快速、灵敏的检测方法用于保健品的市场监控。目前,降压、降糖类违禁添加药物的分析方法主要为仪器分析,如HPLC. LC/MS等,仪器分析具有许多应用局限,如仪器昂贵,样品处理复杂,不适合现场检测,需要专业技术人员。而化学发光免疫分析法由于其灵敏、快速、特异性等优点,有望成为降压、降糖类保健品现场快速检测的有效手段。本实验中针对降压类药物卡托普利,降糖类药物瑞格列奈、那格列奈建立了化学发光免疫分析法。针对卡托普利分子上的巯基,瑞格列奈、那格列奈分子上的羧基合成了免疫原,得到多克隆抗体,酶联免疫分析法对抗体和包被原组合进行了筛选,分别得到最优组合,在ELISA中卡托普利、瑞格列奈、那格列奈的灵敏度分别为1110.92、40.05、72.33 ng/mL。运用控制变量法对化学发光法的各个因素进行优化,发现化学发光法明显优于ELISA,卡托普利、瑞格列奈、那格列奈的灵敏度和线性范围分别为193.54ng/mL,10.16-3685.54 ng/mL.28.58 ng/mL,1-180 ng/mL.4.68 ng/mL,0.1-100 ng/mL,化学发光法的灵敏度相对于酶联免疫法都有所提高,线性范围更宽。将建立的化学发光法用于检测市售保健品,所得结果与仪器法一致。总结：本研究为检测降压降糖类违禁添加药物提供了灵敏、快速、特异性、高效的方法,可用于现场高通量的筛选检测。
【关键词】：化学发光免疫分析 多克隆抗体 违禁添加药物 瑞格列奈 那格列奈 卡托普利
【学位授予单位】：南开大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R917
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-12
• 缩略词12-13
• 第一章 前言13-26
• 第一节 降压、降糖类药物概述13-18
• 1.1.1 降压类化学药物13-14
• 1.1.2 降糖类化学药物14-16
• 1.1.3 降压、降糖类药物检测意义16-18
• 第二节 降压、降糖类药物分析现状18-25
• 1.2.1 仪器分析18-19
• 1.2.2 生物分析19-25
• 第三节 本研究的设计思路25-26
• 第二章 多克隆抗体的制备26-38
• 第一节 实验材料与设备26-27
• 2.1.1 实验试剂与耗材26
• 2.1.2 主要仪器设备26-27
• 2.1.3 缓冲液的配制27
• 第二节 瑞格列奈免疫原及包被抗原的合成与鉴定27-31
• 2.2.1 活化卵清蛋白和牛血清白蛋白27
• 2.2.2 瑞格列奈免疫原及包被抗原的合成27-29
• 2.2.3 瑞格列奈的免疫原和包被原的鉴定29-31
• 第三节 那格列奈免疫原及包被抗原的合成与鉴定31-33
• 2.3.1 那格列奈免疫原及包被原的合成31-32
• 2.3.2 那格列奈免疫原及包被原的鉴定32-33
• 第四节 卡托普利免疫原及包被抗原的合成与鉴定33-36
• 2.4.1 卡托普利免疫原及包被抗原的合成33-34
• 2.4.2 卡托普利免疫原及包被抗原的鉴定34-36
• 第五节 免疫方案及血清处理36-38
• 第三章 酶联免疫分析方法筛选抗体38-46
• 第一节 实验材料与仪器38-39
• 3.1.1 实验试剂及耗材38
• 3.1.2 主要仪器设备38
• 3.1.3 溶液的配制38-39
• 第二节 瑞格列奈ELISA检测体系的建立39-41
• 3.2.1 方阵法优选瑞格列奈抗体及包被抗原的最佳测定浓度39
• 3.2.2 瑞格列奈多克隆抗体效价的测定39-40
• 3.2.3 间接竞争ELISA测定抗体的灵敏度40-41
• 第三节 那格列奈ELISA检测体系的建立41-44
• 3.3.1 方阵法优选那格列奈抗体及包被抗原的最佳测定浓度41-42
• 3.3.2 那格列奈多克隆抗体效价的测定42
• 3.3.3 间接竞争ELISA测定抗体的灵敏度42-44
• 第四节 卡托普利ELISA检测体系的建立44-46
• 3.4.1 方阵法优选卡托普利抗体及包被抗原的最佳测定浓度44
• 3.4.2 卡托普利多克隆抗体效价的测定44
• 3.4.3 间接竞争ELISA测定抗体的灵敏度44-46
• 第四章 化学发光免疫分析方法的建立46-72
• 第一节 实验材料与仪器46-47
• 4.1.1 实验试剂及耗材46
• 4.1.2 主要仪器设备46
• 4.1.3 溶液的配制46-47
• 第二节 瑞格列奈CLIA检测体系的建立47-56
• 4.2.1 瑞格列奈化学发光检测法检测流程47
• 4.2.2 瑞格列奈化学发光检测体系动力学过程47-48
• 4.2.3 瑞格列奈包被原浓度及抗体浓度的优化48-49
• 4.2.4 间接竞争CLIA法测定瑞格列奈的灵敏度49-50
• 4.2.5 瑞格列奈抗体交叉反应(CR)率的测定50-52
• 4.2.6 CLIA法测定瑞格列奈精密度与回收率的测定52-55
• 4.2.7 CLIA法测定瑞格列奈在实际体系中的应用55-56
• 第三节 那格列奈CLIA检测体系的建立56-64
• 4.3.1 那格列奈化学发光检测流程56
• 4.3.2 那格列奈化学发光检测体系动力学过程56-57
• 4.3.3 那格列奈包被原浓度及抗体浓度的优化57-58
• 4.3.4 间接竞争CLIA法测定那格列奈的灵敏度58-59
• 4.3.5 那格列奈抗体交叉反应(CR)率的测定59-60
• 4.3.6 CLIA法测定那格列奈回收率的测定60-61
• 4.3.7 CLIA法测定那格列奈在实际体系中的应用61-63
• 4.3.8 CLIA法与HPLC法测定那格列奈的对比63-64
• 第四节 卡托普利CLIA检测体系的建立64-72
• 4.4.1 卡托普利化学发光检测体实验步骤64-65
• 4.4.2 卡托普利化学发光检测体系动力学过程65
• 4.4.3 卡托普利CLIA条件的优化65-68
• 4.4.4 间接竞争CLIA法测定卡托普利的灵敏度68-69
• 4.4.5 卡托普利抗体交叉反应(CR)率的测定69
• 4.4.6 CLIA法测定卡托普利回收率的测定69-70
• 4.4.7 CLIA法测定卡托普利在实际体系中的应用70-72
• 第五章 结论72-73
• 参考文献73-77
• 致谢77-78
• 个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果78

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