安菲博肽对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

发布时间：2017-04-18 18:04

  本文关键词：安菲博肽对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：缺血性脑血管疾病是指由于多种因素引起脑血流中断,造成局部区域缺血缺氧,从而导致神经功能障碍的一类中枢神经系统常见病和多发病。临床采用的溶栓治疗和机械再通可及时恢复血液供应,但不可避免会继发严重的缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury),进一步加重病情。本课题所用的安菲博肽(Anfibatide,ANF)是从我国皖南尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得到的多肽,是一种特异性血小板膜糖蛋白(glycoprotein,GP)Ib受体拮抗剂。本课题组已报道了ANF可以有效降低脑缺血再灌注损伤模型小鼠的脑梗死体积并且促进神经功能恢复。本课题进一步研究了ANF对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用及其可能的作用机制。目的:探讨安菲博肽(ANF)对急性局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:使用改良线栓法制备小鼠右侧大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)致局灶性脑缺血再灌注模型。雄性昆明小鼠随机分为:假手术组,模型组,ANF(1,2,4 ug/kg)组和阳性药替罗非班(Tirofiban,TRF,0.5 mg/kg)组。缺血90 min再灌注1 h后尾静脉给药。再灌注24 h,分别检测各组小鼠以下指标:磁共振T2加权成像法(T2-weighted imaging,MRI-T2WI)测脑梗死体积;改良神经功能缺损评分法(modified neurological severity score,m NSS)进行神经功能评分;爬板实验观察平衡和运动功能;尼氏染色和苏木素-伊红染色(hematoxylin and eosin,HE)染色分别观察缺血脑组织神经元完整性和微血栓数量变化;伊文思蓝法(evans blue,EB)观察血脑屏障通透性改变;免疫荧光双标法(immunofluorescence,IF)检测缺血脑组织血小板膜糖蛋白(platelet membrane glycoprotein,GP)Ibα和血管假性血友病因子(von Willebrand Factor,v WF)的表达;免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测缺血脑组织P-选择素(P-selectin)和巨噬细胞分化抗原-1(macrophage-1 antigen,MAC-1)蛋白的表达;IHC和免疫印迹法(western blotting,WB)检测缺血脑组织纤维蛋白(Fibrin(ogen))的表达;测定尾静脉出血时间观察止血功能;darkbin’s法观察缺血脑组织出血含量;测定血小板计数观察血小板数量变化。结果:ANF能明显降低缺血再灌注小鼠脑梗死体积,改善神经功能和运动协调功能;提高完整神经元数量以及减少脑内微血栓数量;降低血脑屏障通透性,降低脑内GPIbα和v WF的丰度,抑制P-selectin,MAC-1以及Fibrin(ogen)蛋白的表达。与TRF组相比,ANF不仅缩短出血时间,而且明显减少脑出血。ANF对血小板数量无明显影响。结论:ANF对线栓法所致小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有较好的保护作用,且有效减少脑出血并发症。其机制可能与抑制GPIbα与v WF,P-selectin和MAC-1的结合而阻止血小板的粘附与聚集,减少Fibrin(ogen)的聚积而降低微血栓形成有关。
【关键词】：脑缺血再灌注损伤 安菲博肽 血小板膜糖蛋白Ib 作用机制
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 英文缩略词对照表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-12
• 2 实验材料12-15
• 3 实验方法15-23
• 4 实验结果23-37
• 5 讨论37-44
• 6 结论44-45
• 参考文献45-52
• 附录52-53
• 致谢53-54
• 综述54-65
• 参考文献61-65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 孙艳;张洹;谭广销;;小鼠线栓法局灶性脑缺血再灌注模型的改良[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2005年06期

2 魏尔清,朱朝阳,徐秋琴,俞月萍,朱也飞,郑敏之;一种改进的小鼠局灶性脑缺血神经症状定量评价方法[J];生理学报;2003年06期

3 王家骥,王取南,徐德祥,孙美芳,李兆羿,承新;抗血小板溶栓素的生物相容性及免疫毒性实验研究[J];卫生毒理学杂志;1999年04期

  本文关键词：安菲博肽对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：315421