多层载药微球型骨修复材料的制备及其对HPMSCs生物学活性影响的研究

发布时间：2017-05-01 07:10

  本文关键词：多层载药微球型骨修复材料的制备及其对HPMSCs生物学活性影响的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的:1.人胎盘来源的间充质干细胞(HPMSCs)已成为间充质干细胞的重要获得途径,并被证明与其他来源间充质干细胞相比有明显的优势。本实验尝试从胎盘中分离培养HPMSCs,并对其生物学特征进行鉴定;2.在无菌环境中制备装载VEGF/万古霉素的藻酸盐-壳聚糖多层缓释微球,并检测其对共培养的HPMSCs增殖活性及成骨活性有何影响。研究方法:1.将无菌条件下获取的人足月胎盘组织带回实验室,采用组织块贴壁法分离培养原代HPMSCs,MTT检测细胞生长曲线,对HPMSCs进行成骨及成脂诱导验证其多向分化潜能;2.按照前期实验确定的多层载药缓释微球的制备方法,选择试剂最优配比,探索无菌环境中多层载药缓释微球的制备;将制备好的微球与HPMSCs共同培养,CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,茜素红染色及ALP试剂盒检测细胞成骨能力变化。研究结果:1.从人足月胎盘组织中分离培养的细胞呈成纤维细胞样贴壁生长,生长曲线呈“S”形,成骨诱导后可见胞外钙盐沉积、茜素红染色阳性,成脂诱导后油红O染色阳性;2.经改良后制得的多层载药缓释微球大小均匀、表面光滑圆整,细菌学检测结果证明其符合无菌标准;3.共培养后的HPMSCs增殖能力无明显改变(P0.05),成骨诱导后茜素红染色显示载药微球组钙盐沉积明显多于空载微球组及对照组,ALP试剂盒测试结果证实加入载药微球后细胞内碱性磷酸酶含量明显增高(P0.05),空载组与无球组相比也有显著性差异(P0.05)。研究结论:1.成功从人胎盘组织中分离培养出HPMSCs,对其生物学特征鉴定后证明其符合干细胞特性;2.成功制备出符合实验要求的载VEGF/万古霉素的海藻酸-壳聚糖多层载药缓释微球。3.通过多层载药缓释微球与HPMSCs共培养,成功证明其对HPMSCs增殖活性无明显影响,但能显著改善HPMSCs的成骨活性。
【关键词】：人胎盘源间充质干细胞 生物学特性 多层载药缓释微球 VEGF
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R943
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略词表10-11
• 第1章 引言11-16
• 1.1 人胎盘源间充质干细胞11-12
• 1.2 多药载药缓释系统的研究进展12-16
• 第2章 人胎盘源间充质干细胞的分离、培养及鉴定16-24
• 2.1 实验材料17-18
• 2.1.1 细胞来源17
• 2.1.2 主要实验仪器及试剂17-18
• 2.2 实验方法18-20
• 2.2.1 主要试剂配制18-19
• 2.2.2 人胎盘源间充质干细胞的分离及培养19
• 2.2.3 生长曲线绘制19
• 2.2.4 成骨诱导分化19
• 2.2.5 成脂诱导分化19-20
• 2.3 结果20-22
• 2.3.1 人胎盘源间充质干细胞的分离及培养20
• 2.3.2 生长曲线绘制20-21
• 2.3.3 成骨诱导分化21
• 2.3.4 成脂诱导分化21-22
• 2.4 讨论22-24
• 第3章 多层载药微球对HPMSCS生物学活性影响24-33
• 3.1 实验材料24-26
• 3.2 实验方法26-28
• 3.2.1 多层载药缓释微球的制备26-27
• 3.2.2 多层载药缓释微球与HPMSCs共培养27
• 3.2.3 共培养后的HPMSCs增殖活性检测27
• 3.2.4 共培养后的HPMSCs成骨诱导活性检测27-28
• 3.2.5 统计学分析28
• 3.3 结果28-31
• 3.3.1 多层载药缓释微球的制备28
• 3.3.2 多层载药缓释微球与HPMSCs共培养28-29
• 3.3.3 共培养后的HPMSCs增殖活性检测29
• 3.3.4 共培养后的HPMSCs成骨诱导活性检测29-31
• 3.4 讨论31-33
• 第4章 结论33-34
• 参考文献34-38
• 作者简介及在学期间取得的科研成果38-39
• 致谢39

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本文编号：338462