肝微粒体酶CYP2C9、CYP2D6和CYP3A对艾瑞昔布在大鼠体内代谢的影响

发布时间：2017-05-29 20:11

  本文关键词：肝微粒体酶CYP2C9、CYP2D6和CYP3A对艾瑞昔布在大鼠体内代谢的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:建立LC-MS/MS测定大鼠血浆中艾瑞昔布浓度的方法,并对艾瑞昔布在大鼠体内的代谢进行研究探索,完善其药代动力学研究。方法:色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈:水:甲酸(85:15:0.1,V/V/V),流速为1.0 m L·min-1,柱温为30℃,进样量为10μL,内标:甲苯磺丁脲。质谱条件:离子化方式:电喷雾离子化源(electrospray ionization,ESI);检测方式:正离子检测;扫描方式:多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM);离子源喷射电压5500 V;离子源温度:550℃;气帘气压力:40 psi;雾化气(GS1,N2)压力:40 psi;辅助气(GS2,N2)压力:40 psi;碰撞气压力:6 psi;艾瑞昔布的解簇电压(declustering potential,DP)和碰撞电压(collision energy,CE)值分别为100 V和45 e V,甲苯磺丁脲的DP和CE值分别为22 V和32 e V;用于定量分析的离子反应质荷比(mass-charge ratio,m/z)分别为370.1→236.2(艾瑞昔布)和271.2→155.0(甲苯磺丁脲)。动物实验方法:健康雄性SD大鼠80只,随机分为四组。四组大鼠分别灌胃给予蒸馏水、胺碘酮(40 mg·kg-1)、帕罗西汀(2 mg·kg-1)和酮康唑(20 mg·kg-1)。连续给药7天,1次/d。四组大鼠均于第8天灌胃给予艾瑞昔布(20 mg·kg-1)并分别于给药前(0 min)和给药后10 min、20 min、30 min、45 min、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h于眼底静脉丛取血0.5 m L,6500×g离心10 min后取血浆200μL,冷冻保存。血浆处理方法:取血浆200μL,加内标溶液20μL,涡旋混匀10 s,加提取剂乙酸乙酯1 m L,涡旋混匀1 min,4500×g离心8 min,取上清液于1.5 m L离心管中,40℃水浴氮气吹干,400μL流动相复溶,10μL进样测定。药动学参数处理方法:采用DAS 2.0软件对每只大鼠的系列血药浓度进行统计矩自动拟合并得到药动学参数,采用SPSS 13.0软件对实验组与对照组的主要药动学参数进行统计学分析。若比较的两组参数均服从正态分布,则选用两个独立样本的t检验进行分析,若其中一组不服从正态分布,则选用非参数检验进行分析。P值小于0.05认为两组间差异有统计学意义。结果:艾瑞昔布的保留时间为2.27 min,甲苯磺丁脲的保留时间为2.26 min,血浆内源性杂质对其浓度的测定无干扰;标准曲线为Y=0.016 X+0.072(r=0.9997);艾瑞昔布低(20 ng·m L-1)、中(80 ng·m L-1)、高(320 ng·m L-1)三个浓度的方法回收率依次为102.2%,98.71%和97.01%,提取回收率分别为61.65%,65.33%和72.57%,甲苯磺丁脲的提取回收率为51.64%;艾瑞昔布低、中、高三个浓度的日内RSD分别为8.8%,2.8%和1.9%,日间RSD分别为7.4%,2.0%和1.9%;艾瑞昔布血浆样品于 40℃低温保存30天及反复冻融三次后性质稳定,且处理后的血浆样品于4℃放置12 h对测定无影响。对照组大鼠体内艾瑞昔布的药动学参数如下:AUC0-t:1125.1±457.6 mg·h·L-1,AUC0-∞:1331.3±592.6 mg·h·L-1,t1/2:7.4±3.8 h,Tmax:1.5±0.6 h,CL:0.02±0.01 L·h-1·kg-1,V:0.17±0.07 L·kg-1和Cmax:162.2±53.0 mg·L-1。合用胺碘酮后,大鼠体内艾瑞昔布的药动学参数如下:AUC0-t:1814.8±693.4 mg·h·L-1,AUC0-∞:2091.6±887.1 mg·h·L-1,t1/2:7.8±4.5 h,Tmax:1.7±0.6 h,CL:0.01±0.01 L·h-1·kg-1,V:0.11±0.05 L·kg-1和Cmax:268.2±115.7 mg·L-1。合用帕罗西汀后,大鼠体内艾瑞昔布的药动学参数如下:AUC0-t:1485.5±480.3 mg·h·L-1,AUC0-∞:1730.4±606.5 mg·h·L-1,t1/2:7.3±5.2 h,Tmax:1.5±0.7 h,CL:0.01±0.01 L·h-1·kg-1,V:0.12±0.06 L·kg-1和Cmax:192.1±70.6 mg·L-1。合用酮康唑后,大鼠体内艾瑞昔布的药动学参数如下:AUC0-t:1191.9±626.7 mg·h·L-1,AUC(0-∞):1391.0±692.0 mg·h·L-1,t1/2:8.0±4.2 h,Tmax:1.5±0.7 h,CL:0.02±0.01 L·h-1·kg-1,V:0.19±0.11 L·kg-1和Cmax:159.0±70.5 mg·L-1。与对照组相比,合用胺碘酮后药动学参数AUC0-t,AUC0-∞,Cmax均明显增大,CL,V明显减小,且差异具有统计学意义;合用帕罗西汀后,AUC0-t,AUC0-∞,Cmax显著增大,CL显著减小,差异有统计学意义;合用酮康唑后,所有参数与对照组间的差异均没有统计学意义。结论:本文所建立的LC-MS/MS测定艾瑞昔布浓度的方法,简便、准确、灵敏度高、重现性好,适用于大鼠体内血浆中艾瑞昔布浓度的测定。合用胺碘酮后,大鼠体内艾瑞昔布的暴露率增大,清除减慢,说明艾瑞昔布的代谢减慢,CYP 2C9受到抑制后影响了艾瑞昔布在大鼠体内的代谢,进一步表明CYP 2C9参与了艾瑞昔布在大鼠体内的代谢;合用帕罗西汀后,大鼠体内艾瑞昔布的AUC明显增大,CL明显减小,表明合用帕罗西汀后艾瑞昔布的代谢因CYP 2D6的活性受到抑制而减慢,CYP 2D6参与大鼠体内艾瑞昔布的代谢;合用酮康唑前后,大鼠体内艾瑞昔布的药动学参数均无显著变化,提示CYP 3A可能没有参与艾瑞昔布在大鼠体内的代谢。
【关键词】：艾瑞昔布 肝微粒体酶 代谢 胺碘酮 帕罗西汀 酮康唑
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-12
• 引言12-14
• 第一部分 LC-MS/MS法测定大鼠血浆中艾瑞昔布的浓度14-35
• 前言14-15
• 材料与方法15-19
• 结果19-21
• 附图21-25
• 附表25-32
• 讨论32-33
• 小结33
• 参考文献33-35
• 第二部分 CYP 2C9、CYP 2D6 和CYP 3A抑制剂对艾瑞昔布在大鼠体内代谢的影响35-74
• 前言35-36
• 材料与方法36-39
• 结果39-40
• 附图40-58
• 附表58-68
• 讨论68-70
• 小结70
• 参考文献70-74
• 结论74-75
• 综述 非甾体抗炎药的研究现状与展望75-85
• 参考文献81-85
• 致谢85-86
• 个人简历86-87

【引证文献】

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 黄佳;陈笑艳;段晓涛;郭宗儒;褚凤鸣;钟大放;;液相色谱-串联质谱法同时测定人血清中艾瑞昔布和艾瑞昔布羟基代谢物[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年

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本文编号：405613