槟榔碱对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

发布时间：2017-06-11 01:08

  本文关键词：槟榔碱对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 采用不同浓度的槟榔碱处理3T3-L1前脂肪细胞，观察它对脂肪细胞分化的影响，并初步探讨其机制。 方法 (1)采用MTT(噻唑蓝, Methylthiazolyl tetrazolium)法检测槟榔碱对3T3-L1前脂肪细胞的细胞毒性作用。 (2)用传统的“鸡尾酒”法(即含胰岛素、地塞米松和异丁基甲基黄嘌呤(isobutyl methyl xanthine, IBMX)的混合诱导剂)将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化，在诱导分化的第0天用或不用100μmol/L槟榔碱处理72h，于诱导分化的第9~11天，用油红O染色，观察拍照，并用异丙醇提取脂质吸附的油红O染料，测定OD值以定量脂质含量。 (3)在诱导分化第3天和第11天，提取细胞的总RNA，RT-PCR检测3T3-L1前脂肪细胞分化相关基因表达，包括诱导分化早期基因Pref-1(前脂肪细胞因子,preadipocyte factor1,)、C/EBPα和C/EBPβ(CCAAT增强子结合蛋白α和β, CCAAT-enhancer binding protein-alpha and beta)，脂肪生成相关基因Fas (脂肪酸合成酶,fatty acid synthase,)、adrp(脂肪分化相关蛋白, adipose differentiation-related protein/adipophilin)和plin (围脂滴蛋白, perilipin)，诱导分化成熟标志基因PPARγ2(过氧化物酶体增殖物激活受体, peroxisome proliferator-activated receptor gamma2)、Glut4(葡萄糖转运体4, glucose transporter type4)。 结果 (1)槟榔碱对3T3-L1前脂肪细胞具有一定的细胞毒性。在0-800μmol/L浓度范围内细胞相对存活率随浓度增大而明显降低，具有浓度依赖性。100μmol/L槟榔碱处理3T3-L1前脂肪细胞24h、48h、72h和96h，细胞存活率之间无明显差异，约为70%。当槟榔碱浓度≥200μmol/L时，槟榔碱处理48h、72h、96h细胞存活率均显著低于24h，均小于20%，，而48h、72h和96h之间的细胞活性无显著性差异。 (2)油红O染色显示槟榔碱处理组(Are,100μmol/L Arecoline)中含有“戒环”样脂滴成熟脂肪细胞的数目明显少于对照组(Control,0μmol/LArecoline)。脂肪细胞脂质含量定量结果显示：槟榔碱处理组脂质含量较对照组减少24.2%。 (3)100μmol/L槟榔碱对前脂肪细胞因子Pref-1基因表达无显著影响，但可显著降低诱导分化第3天和11天的C/EBPα和C/EBPβ基因表达。在诱导分化第3天和第11天，与对照组相比，槟榔碱处理组C/EBPα基因表达水平分别降低10.7%和7.6%；而C/EBPβ基因表达水平分别降低13.8%和40.5%。 (4)100μmol/L槟榔碱不影响脂肪酸合成酶基因Fas的表达，但显著降低Adrp和plin的mRNA水平。在诱导分化第3天和第11天，与对照组相比，槟榔碱处理组Adrp基因表达水平分别下降17.8%和5.1%；而plin基因表达水平分别下降9.2%和15.0%。 (5)随着3T3-L1前脂肪细胞分化成熟，脂肪细胞分化成熟基因PPARγ2和Glut4的表达水平显著升高，但100μmol/L槟榔碱可显著降低PPARγ2和Glut4的表达。在诱导分化第3天和第11天，与对照组相比，槟榔碱处理组PPARγ2的基因表达分别减少21.9%和26.2%；而Glut4基因表达分别减少12.2%和43.9%。 结论 槟榔碱可显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化成熟，其机制可能与其下调C/EBPα基因和C/EBPβ基因、 Adrp基因和plin基因、PPARγ2基因和Glut4基因的表达有关。
【关键词】：槟榔碱 3T3-L1前脂肪细胞 分化
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R96
【目录】：

• 英文缩略词表6-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-16
• 材料与方法16-26
• 1. 细胞16
• 2. 试剂16
• 3. 实验仪器与设备16-17
• 4. 试剂配制17-19
• 5. 实验方法19-25
• 6. 数据统计分析25-26
• 结果26-35
• 1. 3T3-L1 前脂肪细胞分化26-27
• 2. 槟榔碱对 3T3-L1 前脂肪细胞的毒性作用27-28
• 3. 槟榔碱对脂质形成的影响28-30
• 4. 槟榔碱对 3T3-L1 前脂肪细胞分化相关基因表达的影响30-35
• 4.1 总 RNA 浓度和质量分析30-31
• 4.2 槟榔碱对分化早期基因(Pref-1、C/EBPα和 C/EBPβ基因)表达的影响31-32
• 4.3 槟榔碱对脂肪生成基因(Fas、Adrp 和 plin 基因)表达的影响32-34
• 4.4 槟榔碱对脂肪分化成熟基因(PPARγ2 和 Glut4 基因)表达的影响34-35
• 讨论35-39
• 1. 槟榔碱浓度的选择36
• 2. 槟榔碱对 3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响36-39
• 结论39-40
• 参考文献40-46
• 综述46-52
• 参考文献50-52
• 附录52-53
• 攻读硕士学位期间发表的文章52-53
• 致谢53

【共引文献】

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1 杨福孙;孙爱花;王燕丹;符常明;周兆德;陈慧娟;;遮光处理对槟榔苗期叶绿素荧光特征的影响[J];广东农业科学;2009年05期

2 陈歆;杨福孙;周兆德;符常明;;土壤水分胁迫对槟榔幼苗光合特性的影响[J];热带农业科学;2010年02期

3 陈歆;杨福孙;周兆德;;土壤水分胁迫对槟榔幼苗叶片生理的影响[J];热带作物学报;2010年03期

4 祁静;黄玉林;陈卫军;唐敏敏;郑亚军;赵松林;;槟榔酚类物质生理活性研究进展[J];热带作物学报;2010年06期

5 陈歆;刘贝贝;韩丙军;周兆德;彭黎旭;杨福孙;;土壤水分胁迫对槟榔幼苗叶绿素荧光动力学参数的影响[J];热带作物学报;2012年02期

6 郑锦星;李忠海;袁列江;钟海雁;;槟榔生理效应研究进展[J];食品科技;2006年09期

7 Mustafa Abdo Saif Dehwah;;MicroRNAs and Type 2 Diabetes/Obesity[J];遗传学报;2012年01期

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1 李雷;IVF出生小鼠及其后代基因组DNA甲基化修饰变化研究[D];浙江大学;2011年

2 胡延佳;口腔粘膜下纤维性变发病相关基因的筛选与初步鉴定[D];中南大学;2009年

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1 余美绒;竹笋环保口香糖的研究[D];中南林业科技大学;2007年

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3 何双;加工对槟榔功能特性影响的研究[D];中南林业科技大学;2009年

4 何京亮;食用槟榔酶法软化技术研究[D];中南林业科技大学;2009年

5 聂晓文;湘潭市中小学生嚼食槟榔行为的认知因素探讨及干预研究[D];湖南科技大学;2009年

6 金德磊;槟榔碱及其片剂的制备与质量标准的制定[D];甘肃农业大学;2009年

7 亓竹青;槟榔碱对2型糖尿病大鼠胰腺细胞的保护作用及其机制[D];南华大学;2010年

8 姚起鑫;槟榔碱通过CAR、PXR改善高糖诱导的2型糖尿病大鼠肝糖代谢紊乱[D];南华大学;2010年

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本文编号：440428