【摘要】：目的:胃肠积热是无形热邪或有形热结壅于胃肠,而致胃肠气分热盛的证态,其形成的主要原因是饮食积滞,蕴而化热。胃肠积热常见于小儿,与小儿肺炎的发生和发展密切相关。小儿肺炎患者也多有胃肠积热表现,故临床应予以肺胃同治法治疗。银莱汤以肺胃同治法组方,由金银花、连翘、黄芩、鱼腥草、前胡、莱菔子和全瓜蒌组成,全方在上可清宣太阴肺经之热邪,在下可清泄阳明胃肠之积滞,共奏肺胃同治之效,临床用于治疗小儿肺炎兼有胃肠积热者,疗效显著。小儿肺炎是由不同病原体或其他因素所致的肺部炎症,是儿童呼吸系统常见疾病。引起小儿肺炎的病原体主要有细菌、病毒、支原体、衣原体等,但各种病原体所致的肺炎均以发热、咳嗽、气促、肺部固定湿Up音等为典型表现,可参考中医的小儿肺炎喘嗽辨证治疗。脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)是革兰阴性菌内毒素的主要成分,可介导机体的炎症反应,且因其毒性较弱,各菌间LPS产生的炎症反应类似,无明显特异性,可用于非特异性肺炎模型的制备。前期研究运用病因学造模方法,成功复制了以高热量高蛋白饮食为特点的胃肠积热小鼠模型,并在此基础上研究胃肠积热对肺炎小鼠的影响,以及银莱汤的干预作用,发现胃肠积热可导致肺炎小鼠肺指数增加,肺损伤加重,而银莱汤可明显减轻胃肠积热复合肺炎模型小鼠的肺损伤情况。之后分别从炎症、免疫和肠黏膜屏障等方面对胃肠积热的致病机制和银莱汤的作用机制进行了探讨。但相关研究仍缺乏系统性的评价,其有关机制仍有待进一步明确。本课题在前期研究基础上,拟运用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白质组学技术,观察肺炎模型小鼠和胃肠积热复合肺炎模型小鼠肺组织蛋白质组学特征,并在此基础上进一步比较分析胃肠积热对肺炎小鼠肺组织蛋白表达的影响,以及银莱汤对胃肠积热复合肺炎小鼠肺组织蛋白表达的影响,以期从肺组织蛋白质组学层面部分阐明胃肠积热影响小儿肺炎发生发展的物质基础,以及银莱汤治疗胃肠积热复合肺炎的作用机制,从而为小儿肺炎的预防和治疗提供一定的实验依据。方法:通过LPS雾化吸入诱导小鼠肺炎模型(M1组),通过高热量高蛋白饮食复合LPS雾化吸入诱导小鼠胃肠积热复合肺炎模型(M2组),以银莱汤为胃肠积热复合肺炎模型的干预药物(Y组),观察三组小鼠脾指数、胸腺指数、肺指数和肺组织病理变化情况,之后运用iTRAQ标记蛋白质组学技术,观察各组小鼠肺组织蛋白表达情况,并进一步分析各组间蛋白差异表达情况。结果:1.肺指数、脾指数和胸腺指数的变化与正常组比较,M1组和M2组的肺指数明显升高(p0.05);与M1组比较,M2组肺指数明显升高(p0.05);与M2组比较,Y组肺指数降低,但差异不明显(p=0.458)。与正常组比较,M2组脾指数明显升高(p0.05),M1组脾指数升高,但差异不明显(p=0.39)。与M1组相比,M2组脾指数升高,但差异不明显(p=0.204)。与M2组比较,Y组脾指数明显升高(p0.05)。与正常组比较,M1组和M2组胸腺指数降低,但差异不明显(p0.05)。与M1组比较,M2组胸腺指数降低,但差异不明显(p0.05)。与M2组比较,Y组胸腺指数升高,但差异不明显(p0.05)2.肺组织病理变化M1组小鼠肺组织出现肺泡结构破坏,肺间隔增宽,存在肺泡融合并伴有炎性细胞浸润。M2组小鼠肺组织病变程度较M1组重,有明显肺实变,有大量炎症细胞浸润。Y组小鼠肺组织病变程度较M2组减轻,肺间隔增厚减少,周围间质内炎性浸润减少。3.肺组织蛋白表达情况本次实验共鉴定出2626个可信蛋白(peptides≥1,且在三次实验中可重复出现)。以p0.05,差异变化倍数(Fold Change, FC)大于1.5为标准筛选各组间差异蛋白。与正常组相比,M1组小鼠肺组织中有344种差异表达蛋白,其中224种表达上调,120种表达下调;其涉及有显著变化(p0.05)的生物学过程有1287个,细胞组分有197个,分子功能有234个,KEGG通路有26个。其中生物学过程主要有机体对有机物的反应、细胞因子响应、细胞对化学刺激的反应、机体对化学物质的反应、细胞对细胞因子刺激的反应、机体对外部刺激的反应、防御反应和免疫系统进程等;相关的信号通路主要有细胞外基质相互作用、白细胞迁移、FcγR介导的吞噬作用、补体系统、抗原提呈和加工、核糖体、氨基酰转运RNA合成、蛋白质在内质网上的加工、氨基酸合成、碳代谢、糖酵解/糖异生和磷酸戊糖途径等。与正常组相比,M2组小鼠肺组织中有521种差异表达蛋白,其中273种表达上调,248种表达下调;其涉及有显著变化(p0.05)的生物学过程有1158个,细胞组分有242个,分子功能有234个,KEGG通路有39个。其中生物学过程主要有生物附着、细胞粘附、机体对有机物的反应、机体对化学物质的反应、免疫系统进程、防御反应、细胞因子响应、有机氮化合物代谢过程、肽代谢过程、气体运输、小分子代谢和氧化还原反应等;而相关的信号通路主要有细胞外基质相互作用、黏着斑、细菌入侵上皮细胞、白细胞迁移、吞噬体、核糖体、碳代谢和三羧酸循环等。与M1组比较,M2组小鼠肺组织中有164种差异表达蛋白,其中14种表达上调,150种表达下调,其涉及有显著变化(p0.05)的生物学过程有588个,细胞组分有131个,分子功能有144个,KEGG通路有20个。其中生物学过程主要有小分子代谢过程、气体运输、嘌呤核糖核苷酸代谢过程、核糖核苷酸代谢过程、磷酸核糖代谢、细胞粘附和生物附着等。而相关信号通路主要有氧化磷酸化、三羧酸循环、丁酸甲酯代谢、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解、核糖体、细胞外基质相互作用、黏着斑、补体系统和血管平滑肌收缩等。与M2组比较,Y组肺组织中有87种差异表达蛋白,其中73种表达上调,14种表达下调,其涉及有显著变化(p0.05)的生物功能有403个,细胞组分有112个,分子功能有114个,KEGG通路有21个。其中生物过程主要有柠檬酸代谢过程、细胞呼吸、三羧酸代谢过程、三羧酸循环、有机化合物氧化供能以及前体代谢物和能量的产生等。而相关的信号通路主要有三羧酸循环、氧化磷酸化、脂肪酸代谢、色氨酸代谢、赖氨酸降解、缬氨酸亮氨酸异亮氨酸降解和核糖体等。结论:1.胃肠积热能够加重LPS所诱导的肺炎模型小鼠肺部炎症损伤,而银莱汤能够减轻胃肠积热复合肺炎模型小鼠的肺部炎症损伤。2.LPS雾化吸入不仅能够引起肺组织炎症,还可以影响蛋白质的合成和碳水化合物的代谢。3.胃肠积热可能通过影响小鼠的物质能量代谢,进一步影响其免疫功能,进而加重LPS所致的炎症损伤。4.银莱汤可能通过调节胃肠积热复合肺炎小鼠的物质能量代谢,达到其治疗作用。5.三羧酸循环功能的改变可能是胃肠积热致病作用和银莱汤治疗作用的关键环节之一。
【图文】：
基十蛋ｄ质组学对胃肠积热复合肺炎小鼠生物学特征及银莱汤干预作用的研宄逡逑表１．１各组小鼠肺指数、脾指数和胸腺指数（ｘ土ｓ）逡逑Ｄ逦Ｍｌ逦Ｍ２逡逑肺指数逦７．２８７邋＋邋０．４５１逦９．７４２邋±０．７４４＊￣１０．８９１＋０．９７８＊＃￣￣逡逑脾指数逦３．６３６±０．３８２逦３．８４５邋±０．４３５邋４．１５７邋＋邋０．６６０＊逡逑胸腺指数逦４．７０２邋＋邋０．８６３逦４．５９９邋＋邋０．５８４邋４．４７０邋＋邋０．６９８逡逑注：＊与Ｄ组比较，Ｐ＜０．０５；邋＃与Ｍｌ组比较，，ｐ＜０．０５。逡逑－逦逦逦逡逑
图ｉ．ｉ各组小鼠肺指数、脾指数和胸腺指数柱状图逡逑１．３肺＿病理改变逡逑肺组织病理显示（图１．３），正常组小鼠肺组织肺泡结构一致，肺泡壁薄，肺泡腔及逡逑管腔内无炎性浸润，细支气管结构完整清晰，单层柱状或立方上皮细胞排列紧密，上皮逡逑外平滑肌呈完整环形。胃肠积热合并肺炎组和肺炎组小鼠肺组织均出现肺泡结构破坏不逡逑清，肺间隔显著增宽，存在肺泡融合甚至消失，血管扩张充血，并伴有大量炎性细胞浸逡逑润。单层柱状上皮细胞排列紊乱，细胞脱落明显，管腔及其周围肺间质内存在大量炎性逡逑细胞浸润。肺炎组小鼠肺组织病变程度较胃肠积热合并肺炎组轻，肺泡边界相对清楚，逡逑肺泡壁较薄，肺间隔增厚，伴血管充血，肺泡腔及管腔内少量炎性细胞漫润，周围间质逡逑内炎性浸润较少，单层柱状上皮细胞排列相对整齐紧密。逡逑４７逡逑
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 甄建华;于河;谷晓红;;胃肠积热的古今病因、病机学研究[J];环球中医药;2017年02期
2 王云辉;李晓菲;甄建华;于河;刘铁钢;谷晓红;;银莱汤对食积复合FM1流感病毒感染小鼠血清免疫球蛋白及细胞因子含量的影响[J];环球中医药;2016年10期
3 李聪;谢鸣;赵荣华;孙伟;郭正光;;肝郁脾虚证模型大鼠肝脏的蛋白组学研究[J];中华中医药杂志;2016年10期
4 董斐;于河;刘铁钢;郑子安;万宇翔;严利依;王云辉;吴力群;谷晓红;;中医病因学研究新模式下探索胃肠积热在小儿反复呼吸道感染发病中的作用[J];中华中医药杂志;2016年05期
5 陈文莉;罗鸣;陈小苹;黄晶;陈仁;;慢性乙型肝炎同病异证发病的分子机制:蛋白质组学分析[J];南方医科大学学报;2016年03期
6 丛金鹏;郝文嘉;于文成;;MMP-9与TIMP-1及其在慢性阻塞性肺疾病中的作用[J];青岛大学医学院学报;2015年02期
7 肖荃月;于河;刘曜纶;谷晓红;;谷晓红运用银莱汤加减治疗小儿发热[J];吉林中医药;2015年03期
8 张望;于河;刘铁钢;甄建华;吕国凯;李晓菲;谷晓红;;银莱汤对食积复合流感病毒感染小鼠免疫功能的影响[J];北京中医药大学学报;2014年08期
9 吕国凯;于河;谷晓红;;银莱汤加减治疗小儿肺胃积热型感冒40例病例系列研究[J];浙江中医药大学学报;2014年08期
10 刘铁钢;于河;张望;吕国凯;甄建华;李晓菲;董斐;谷晓红;;银莱汤对食积肺炎小鼠肠黏膜机械屏障的作用及机制[J];中华中医药杂志;2014年08期
相关会议论文 前1条
1 王煊;于河;刘铁钢;张霞;谷晓红;;银莱汤二号方加减治疗小儿肺胃积热型呼吸道感染20例病例系列研究[A];第三次全国温病学论坛暨温病学辨治思路临床拓展应用高级研修班论文集[C];2016年
相关博士学位论文 前7条
1 周晟芳;名老中医刘志明滋肾活血方对大鼠缺血心肌蛋白质组学及分子机理研究[D];中国中医科学院;2016年
2 邱俊;四君子汤对慢性心衰大鼠心肌组织蛋白质组学影响的研究[D];广州中医药大学;2014年
3 曹彬;四君子汤对慢性心衰大鼠肝脏蛋白质组学的影响研究[D];广州中医药大学;2014年
4 王超;慢性肾脏病的尿液蛋白质组学及升清降浊胶囊的作用机制研究[D];广州中医药大学;2014年
5 郑秀丽;基于肺肠微生态和MEK/ERK信号通路探讨肺与大肠病理传变的生物学基础[D];成都中医药大学;2013年
6 张颖;左归丸对去卵巢所致骨质疏松症大鼠股骨骨髓中相关蛋白质的影响[D];中国中医科学院;2012年
7 杜悦;内毒素致新生大鼠肺血管内皮细胞和基膜改变的特点与肺出血的关系[D];中国医科大学;2003年
相关硕士学位论文 前9条
1 甄建华;小儿胃肠积热证与肠道微生态失调相关性的实验与临床研究[D];北京中医药大学;2015年
2 吕顺武;基于iTRAQ-MS技术HIV/AIDS肺脾气虚证差异表达蛋白研究[D];河南中医学院;2015年
3 吕国凯;胃肠积热证诊断量表编制及其信度和效度评价研究[D];北京中医药大学;2014年
4 孙权;膝骨关节炎中医辩证分型[D];贵阳中医学院;2014年
5 商金榜;食积与小儿反复呼吸道感染病因学相关性研究[D];北京中医药大学;2012年
6 施金凤;小儿肺炎与阳明内热的相关性研究[D];北京中医药大学;2011年
7 王上;肺胃同治法治疗小儿食积外感的研究[D];北京中医药大学;2011年
8 徐雪峰;肺炎支原体感染对人肺上皮细胞蛋白表达的影响[D];浙江大学;2007年
9 于河;肺热证与阳明热证的相关性研究[D];北京中医药大学;2006年
本文编号：
2594031
