熊果酸和齐墩果酸对UGTs酶的影响及其机制

发布时间：2021-03-04 21:38

  背景:齐墩果酸(Oleanolic acid,OA)对肝损伤有一定的保护作用,临床上广泛用于急、慢性肝炎的辅助治疗。熊果酸(Ursolic acid,UA)作为齐墩果酸的同分异构体,其结构和药理作用与齐墩果酸类似,亦具有较好的临床应用前景。课题组前期研究证实熊果酸的体内代谢过程与Ⅱ相代谢酶UGT1A3、UGT1A4介导有关,那么熊果酸及齐墩果酸对UGTs酶活性及表达是否有影响,它们与临床药物联合使用时是否会发生基于UGTs介导的药物相互作用,值得高度关注与研究探讨。目的:通过UGTs重组酶及HepG2细胞模型,系统研究UA和OA对系列UGTs酶活性及其表达的影响,通过体内-体外相互作用推算模型,预测临床药物间发生基于UGTs介导的相互作用风险。方法:(1)UA和OA对UGTs重组酶活性的影响及相互作用风险预测(1)采用重组UGTs酶体外温孵体系,系统探索UA和OA对12种UGTs酶(UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT1A10、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15、UGT2B17)活性的影响。除UGT1A4采用三氟拉嗪作为探针底物,其他UGTs酶均采用其共同的代谢底物4-甲基伞形酮(4-MU)作为探针底物。(2)通过酶动力学研究,求算酶抑制动力学参数IC50值和Ki值,探讨其酶动力学抑制作用类型及影响机制。(3)在酶动力学研究基础上,结合相关文献数据,运用体内-体外相互作用推算模型,预测UA和OA与临床药物间发生基于UGTs介导的相互作用风险。(2)UA和OA对HepG2细胞中UGTs酶mRNA表达水平的影响使用HepG2细胞模型,通过RT-qPCR检测技术,研究UA和OA对8种常见UGTs酶(UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A9、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15)mRNA表达的影响,分析UA和OA与临床药物长期联合用药发生基于UGTs介导的相互作用风险。结果:(1)UA和OA对UGTs重组酶活性的影响及相互作用风险预测在12种UGTs重组酶中,UA和OA只对UGT1A3和UGT1A4的活性有明显抑制作用。UA对UGT1A3的抑制作用呈竞争性抑制,其IC50值为0.391±0.013μM,Ki值是0.185±0.015μM。UA对UGT1A4催化三氟拉嗪葡萄糖醛酸反应也呈现竞争性抑制作用,IC50值为2.651±0.201μM,Ki值是1.334±0.146μM)。OA对UGT1A3的抑制作用呈现混合竞争性抑制作用(竞争性和非竞争性抑制作用同时存在),其IC50值为0.336±0.013μM,Ki值0.176±0.007μM。而OA对UGT1A4呈现竞争性抑制作用,其IC50值是5.468±0.697μM,Ki值为6.298±0.891μM。通过体内-体外药物药物相互作用推算模型进行预测,结果显示UA和OA均对体内UGT1A3酶活性有很强的抑制作用,其[I]in,u/Ki值分别为3.054与1.489(大于1),临床上与UGT1A3的底物药物联用时发生相互作用的风险很高。UA对体内UGT1A4酶活性有较强的抑制作用,其[I]in,u/Ki值为0.424(介于0.1~1之间),临床上与UGT1A4底物药物联用时发生相互作用的风险一般。OA对体内UGT1A4酶活性的抑制作用相对较弱,其[I]in,u/Ki值为0.042(小于0.1),临床上与UGT1A4底物药物联用时发生相互作用的风险很低。(2)UA和OA对HepG2细胞中UGTs酶mRNA表达水平的影响10μM、20μM、40μM的UA对HepG2细胞中UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A9、UGT2B4、UGT2B15 mRNA表达均无明显影响(P0.05)。10μM的OA对HepG2细胞中上述8种常见UGT酶mRNA表达亦无明显影响(P0.05)。但20μM的OA对UGT1A1 mRNA的诱导倍数为1.55倍(P0.001)、UGT1A3为1.49倍(P0.001)、UGT1A4为2.40倍(P0.001)、UGT1A6为3.36倍(P0.001)、UGT1A9为1.30倍(P0.05)、UGT2B4为1.26倍(P0.01)、UGT2B7为1.53倍(P0.001)、UGT2B15为1.29倍(P0.01)。40μM的OA对UGT1A1 mRNA的诱导倍数为1.41倍(P0.001)、对UGT1A3为1.32倍(P0.01)、UGT1A6为1.56倍(P0.01)、UGT1A9为1.69倍(P0.001)、UGT2B15为1.20倍(P0.05)。结论:(1)UA对UGT1A3及UGT1A4均呈现竞争性抑制作用。OA对UGT1A3呈现混合竞争性抑制作用,对UGT1A4呈现竞争性抑制作用。(2)UA和OA均对UGT1A3酶活性有很强的抑制作用,在体内与UGT1A3的底物药物联用时发生相互作用的风险很高。UA对UGT1A4酶活性有较强的抑制作用,在体内与UGT1A4底物药物联用时发生相互作用的风险一般。OA对UGT1A4酶活性的抑制作用相对较弱,在体内与UGT1A4底物药物发生相互作用的风险很低。(3)OA对HepG2细胞中UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A9、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15 mRNA表达均有诱导作用。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈大权;;齐墩果酸鉴定会在长沙召开[J];中国药学杂志;1980年12期

2 孙悦平,吕式琪,姚娴;齐墩果酸对小鼠肝脏的毒性作用[J];生理科学;1983年05期

3 孙悦平;吕式琪;;齐墩果酸对小鼠肝脏的毒性作用[J];北京第二医学院学报;1983年04期

4 孙悦平;吕式琪;;齐墩果酸对小鼠肝脏的毒性作用[J];福建医科大学学报;1983年04期

5 李树殿;从龙牙id木中提取齐墩果酸的研究[J];吉林农业大学学报;1985年03期

6 马伯良,王振宇,杨家海,李剑甫,崔永熙;齐墩果酸的降血脂研究[J];中药药理与临床;1986年00期

7 田振坤;刘中申;匡海学;;刺玫果中齐墩果酸的含量测定[J];中医药学报;1987年03期

8 史东方;齐墩果酸的抗炎作用[J];中国药科大学学报;1989年03期

9 张登科,孙文基,沙振方;35种植物的齐墩果酸含量比较[J];中药材;1989年12期

10 李红兵;马占春;韩其昌;;薄层比色法测定槲寄生、连翘中齐墩果酸的含量[J];中成药;1989年06期

相关博士学位论文 前10条

1 陈小松;齐墩果酸通过胆汁酸受体TGR5减肥作用的分子机制研究[D];福建医科大学;2015年

2 李学超;齐墩果酸在人前列腺癌细胞中的抗癌疗效及其作用机制[D];华中科技大学;2016年

3 武德崴;糖尿病心血管并发症新机制及新型药物治疗研究[D];北京协和医学院;2017年

4 龙成美;齐墩果酸在肾缺血/再灌注损伤中抗氧化应激、炎症反应及凋亡的保护作用与机制研究[D];南昌大学;2017年

5 陈亚军;齐墩果酸纳米悬浮液研究[D];华中科技大学;2005年

6 闫茂才;齐墩果酸衍生物的设计、合成与生物活性研究[D];沈阳药科大学;2008年

7 迟克强;熊果酸类衍生物的设计合成及其抗炎、抗肿瘤作用研究[D];延边大学;2017年

8 孙华;齐墩果酸类化合物的结构改造及抗癌活性研究[D];沈阳药科大学;2007年

9 刘艳玲;高寒藏药材麻花艽及其体细胞杂种齐墩果酸合成关键酶-β-amyrin合成酶基因克隆及其功能鉴定[D];山东大学;2009年

10 刘佳;两种天然产物抗肿瘤作用的分子机制[D];中国科学院研究生院（海洋研究所）;2014年

相关硕士学位论文 前10条

1 谢宏波;熊果酸和齐墩果酸对UGTs酶的影响及其机制[D];南昌大学;2017年

2 杨蕊;齐墩果酸自微乳化制剂的实验研究[D];山东大学;2008年

3 杨真真;组分中药白花蛇舌草肠溶胶囊的制备及其体外释放度的研究[D];福建中医药大学;2015年

4 郭淑晶;齐墩果酸修饰与抗肿瘤活性研究[D];延边大学;2015年

5 王志琴;齐墩果酸对血管紧张素Ⅱ诱导乳小鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其机制[D];四川医科大学;2015年

6 李蔚雯;基于环糊精包合物的齐墩果酸亲水凝胶骨架缓释片研究[D];南昌大学;2015年

7 王玄;齐墩果酸经SIRT1/PML/AP-1信号通路对大鼠动脉血管平滑肌细胞增殖的调控[D];青岛大学;2015年

8 赵紫亮;中药组方治疗膝关节骨性关节炎的实验研究[D];长春中医药大学;2015年

9 赵晓明;齐墩果酸通过miR-122/Cyclin G1/MEF2D对肺癌细胞增殖影响的研究[D];济南大学;2015年

10 张梦;齐墩果酸“引经”作用增强大黄素肝靶向性的研究[D];重庆医科大学;2015年

本文编号：2742035