基于AQP3观察五苓散对肾阳虚水肿模型大鼠水液代谢影响的实验研究

发布时间：2020-03-23 05:27

【摘要】：目的:本研究通过制备肾阳虚水肿大鼠模型,观察传统经典方剂五苓散对肾阳虚水肿大鼠水液代谢的影响,并通过免疫组化、RT-PCR、Western Blot等技术检测AQP3的表达情况,以探讨五苓散调节肾阳虚水肿大鼠水液代谢与AQP3的相关性。旨在从水通道蛋白水平揭示经典方剂五苓散干预肾脏水液代谢的调控机制,为临床使用五苓散治疗水液代谢相关疾病提供理论基础和实验依据。方法:1、采用对大鼠臂部肌肉注射氢化可的松、尾静脉注射盐酸多柔比星溶液制备肾阳虚水肿大鼠模型;2、观察大鼠行为学表现,测量其体重、体温、尿量和24h尿蛋白,检测大鼠血清cAMP、cGMP含量;3、随机选取50只造模成功的雄性大鼠,并将其随机分为5组,即模型组(MG组)、五苓散低剂量组(WLS-L组)、五苓散中剂量组(WLS-M组)、五苓散高剂量组(WLS-H组)与呋塞米组(F组),每组10只;并随机选取10只未造模正常大鼠作为空白组(NG组)。4、各组分别进行等体积不同药物灌胃干预治疗7天,用代谢笼装置收集并测定各组大鼠第(1h、2h、4h、24h)的尿液量;5、实验结束后,对各组大鼠腹主动脉采血,处死大鼠,摘取肾脏;6、应用HE染色察看肾脏组织损伤情况;7、应用免疫组化、RT-PCR、Western Blot对大鼠肾脏AQP3 mRNA及AQP3蛋白的表达情况进行检测与分析。结果:1、通过对大鼠行为学观察、体重、体温、尿量及24h尿蛋白的检量,结果显示与NG组比较,肾阳虚水肿造模组的体重、体温均明显下降,尿量减少,24h尿蛋白含量增加;应用ELISA法检测大鼠血清cAMP、cGMP水平发现,与NG组比较,肾阳虚水肿造模的各组cAMP的含量减少,cGMP含量增多,cAMP/cGMP的值显著降低。综上提示本实验造模成功,实验所得肾阳虚水肿模型稳定可靠。2、通过对大鼠24h总尿液量的测量,发现与NG组比较,MG组大鼠24h尿量减少,变化存在显著差异,具有极其显著的统计学意义(p0.01);与MG组比较,WLS-L组、WLS-H组大鼠24h尿量增加,具有统计学意义(p0.05),而WLS-M组、F组24h尿量显著增加,具有极其显著的统计学意义(p0.01)。3、通过对各组大鼠在给药后相应时间点(1h、2h、4h)尿量测量分析,各实验组随时间的增加尿量均有所增加,但各组增加的程度不一致。与NG组比较,MG在给药后1h、2h、4h各时间点尿量均存在显著性差异(p0.01);与MG组比较,WLS-L组、WLS-M组、WLS-H组、F组在给药1h、2h、4h各时间点尿量有极显著的统计学意义(p0.01)。4、通过应用HE染色、免疫组化、RT-PCR、Western Blot技术对大鼠肾脏AQP3 mRNA、AQP3蛋白进行检测,结果表明AQP3主要分布在肾脏肾集合管上皮细胞基侧膜上,经图像软件分析各区域密度灰值可知,与NG组比较,MG组AQP3 mRNA及AQP3蛋白的表达增多,具有统计学意义(p0.01)。与MG组比较,WLS-L组、WLS-M组、WLS-H组及F组中AQP3 mRNA及AQP3的表达均降低,具有统计学意义(p0.01)。结论:1、五苓散对肾阳虚水肿模型大鼠具有利尿作用,其利尿强度与药物浓度有关,五苓散中剂量组利尿功效最显著。2、五苓散对肾阳虚水肿大鼠利尿作用与调控肾脏AQP3有关,其利尿作用可能是通过下调肾脏AQP3 mRNA及AQP3表达量实现的。
【图文】：

体温,肾阳虚,体毛,大鼠

空白组大鼠体毛柔顺、行动灵活、饮食二便均正常；模型组大鼠的体毛枯疏无光泽，脱毛，抱团少动，体重增长缓慢，自主活动，肛温下降，反应迟钝，蜷缩弓背，畏寒怕冷，食少纳差，腹大便稀溏，小便清长等肾阳虚水肿症状，均符合肾阳虚水肿标准大鼠体重、体温比较从实验数据可以看出，与 NG 组比较，MG 组大鼠体重、体温明差异均具有统计学意义（p<0.01），说明机体处于能量代谢下降实验结果如表 1、图 1、图 2。表 1 各组大鼠体重、体温比较（x s，， n=10）体重（g）体温（℃） 299.57±4.61 37.63±0.17 247.85±7.11**34.62±0.62**与 NG 组比较，**p<0.01

尿量,大鼠,尿蛋白,蛋白含量

图 2 大鼠体温比较注：与 NG 组比较，**p<0.01大鼠 24h 尿量及尿蛋白含量比较与 NG 组相比，MG 组大鼠 24h 尿量明显减少，24h 尿蛋白含量，差异均具有统计学意义（ p<0.01）。实验结果如表 2、图 3表 2 各组大鼠 24h 尿量及尿蛋白含量比较（x s， n=10） 24h 尿量（ml） 24h 尿蛋白（mg） 10.88±2.24 12.35±0.47 5.86±1.24**99.06±1.89**与 NG 组比较，**p<0.01
【学位授予单位】：黑龙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【参考文献】