双白术内酯对谷氨酸神经损伤的保护作用及其机制研究

发布时间：2020-03-23 09:00

【摘要】：目的:研究双白术内酯对谷氨酸(Glu)诱导损伤SH-SY5Y细胞和PC12细胞的保护作用,研究探讨其作用机制,为进一步开发双白术内酯成为中枢神经系统退行性疾病药物提供新的理论依据。方法:用不同浓度的Glu处理体外培养的SH-SY5Y和PC12两种细胞,分别建立谷氨酸诱导损伤SH-SY5Y细胞和PC12细胞模型。模型建立成功后,实验分空白对照组、Glu损伤模型组、药物对照组(低,中,高)三组。待细胞培养至70%时,用无血清处理细胞12小时,在分别用7.5mmol/L谷氨酸和10mmol/L谷氨酸孵育PC12细胞和SH-SY5Y细胞24h前提前30min加入不同浓度双白术内酯。接着用MTT法检测SH-SY5Y细胞和PC12细胞生长和增殖活性;用分光光度法测定其培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)的活性、用试剂盒检测其ROS活性、罗丹明123检测细胞线粒体电位变化、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率、吖啶橙(AO)/溴乙锭(EB)双染色荧光染色法检测细胞的凋亡形态变化,最后用western blot检测相关蛋白Akt,P-Akt,GSK3β的变化。结果:当分别用模型浓度Glu孵育PC12细胞和SH-SY5Y细胞24h,细胞增殖活性明显下降,生长情况受到影响,说明模型制造成功。用双白术内酯预先保护后可见:细胞增殖活性得到提高,损伤形态明显有所改善,LDH释放减少,细胞凋亡率降低,ROS释放活性降低,线粒体电位升高,并且呈浓度依赖性。WB结果表明P-Akt蛋白表达水平升高,GSK3β蛋白表达水平降低。结论:双白术内酯对Glu诱导的SH-SY5Y细胞和PC12细胞损伤呈浓度依赖性保护作用,其作用机制可能是通过抑制PI3k-Akt-GSK3β通路发挥保护作用。
【图文】：

图1-2双白术内酯抗AD作用机制

实验结果表明，，7.5mmol/L Glu 对 PC12 细胞的增殖制率达到 48.2±1.5%（P<0.001）（见图 4-1），然而 155Y 细胞的增殖有明显的抑制作用，抑制率达到 39.1±2.1
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2596503