寒痉汤对寒凝型高血压大鼠CGRP、RLX及血管平滑肌细胞UCP2、RXFP2的影响

发布时间：2020-03-24 07:46

【摘要】：第一部分寒痉汤对寒凝型高血压大鼠血清降钙素基因相关肽及松弛素的影响目的:研究中药复方寒痉汤对寒凝型高血压大鼠血清中降钙素基因相关肽和松弛素的影响,以探究寒痉汤降低高血压的相关机制。方法:将24只SD大鼠随机分为对照组、模型组、寒痉汤组,适应性饲养一周。一周后模型组、寒痉汤组给予含8%高盐饲料,自由饮水,并且每天置于(-15±2)℃冰箱中。对照组给予正常饲料,自由饮水,置于24℃~26℃,饲养。测量大鼠尾动脉血压情况,每周三次。从第七周开始寒痉汤组给予中药灌胃治疗,模型组给予生理盐水灌胃,疗程为两周。用药两周后断头取血,采用放射免疫法对各组实验大鼠血清中降钙素基因相关肽进行检测,采用酶联免疫吸附法对各组实验大鼠血清中松弛素进行检测。结果:1.血清中降钙素基因相关肽CGRP(calcitonin generelated peptide):与正常组比较,模型组血清中CGRP表达水平降低,差异有统计学意义(P(27)0.05),与模型组比较,寒痉汤组血清中CGRP表达水平升高,差异有统计学意义(P(27)0.05)。2.血清中松弛素RLX(relaxin):与正常组比较,模型组血清中RLX降低,差异有统计学意义(P(27)0.05),与模型组比较,寒痉汤组血清中RLX表达水平升高,差异有统计学意义(P(27)0.05)。结论:1.寒痉汤降压效果可能与升高血清中降钙素基因相关肽水平有关。2.寒痉汤降压效果可能与升高血清中松弛素水平有关。第二部分寒痉汤含药血清对冷刺激大鼠血管平滑肌细胞UCP2、RXFP2的影响目的:通过体外培养SD大鼠血管平滑肌细胞并且给予寒冷刺激,研究中药复方寒痉汤含药血清对冷刺激大鼠平滑肌细胞UCP2、RXFP2的影响,探讨寒痉汤对寒凝型高血压的防治机制,为临床上寒痉汤防治动脉粥样硬化、高血压等相关心血管疾病提供实验依据。方法:选用大鼠血管平滑肌细胞株(A7R5),传代培养,取4-6代平滑肌细胞进行实验。以冷刺激温度20℃为实验条件分别选择2h、4h、6h、8h为冷刺激时间。采用台盼蓝染色法计数细胞存活率,采用MTT法对实验细胞组进行OD值检测,选择最佳冷刺激时间。选用雄性SD大鼠20只,随机分为五组,各组分别中药灌胃与生理盐水灌胃,制备大鼠中药含药血清,作用于不同组别的平滑肌细胞。将长满皿底的平滑肌细胞随机分为正常组、模型组、寒痉汤组、止痉组、麻辛附组,吸弃原培养基,PBS清洗一遍,加入含药血清:1.正常对照组:DMEM+10%正常大鼠血清;2.模型组:DMEM+10%模型大鼠含药血清3.寒痉汤组:DMEM+10%寒痉汤大鼠含药血清;4.止痉组:DMEM+10%止痉散大鼠含药血清;5.麻辛附组:DMEM+10%麻黄附子细辛汤大鼠含药血清。各组分别加入含10%含药血清细胞培养箱培养24小时。含药血清培养结束后,模型组、寒痉汤组、止痉组、麻辛附组放入20℃温度箱给予冷刺激,正常组置于37℃培养箱培养。采用荧光定量PCR、Western-blotting检测平滑肌细胞中解偶联蛋白2和松弛素受体2的表达。结果:1.细胞冷刺激的温度设定20℃,寒冷刺激的时间在4h存活率降低,4h组与6h组相比较差异有统计学意义,P(27)0.05。2.血管平滑肌细胞解偶联蛋白2蛋白表达,与正常组比较,模型组蛋白表达降低差异有统计学意义,P(27)0.05,与模型组比较,寒痉汤组与麻辛附组、止痉组比较蛋白表达升高,P(27)0.05或0.01。与寒痉汤组比较,止痉组蛋白表达降低,P(27)0.05。血管平滑肌细胞松弛素受体2蛋白表达,与正常组比较,模型组蛋白表达降低,P(27)0.01,与模型组比较,寒痉汤组、麻辛附组和止痉组蛋白表达升高,P(27)0.05或0,01,与寒痉汤组比较,麻辛附组蛋白表达降低,P(27)0.05。3.血管平滑肌细胞解偶联蛋白2基因表达,与正常组比较,模型组基因表达降低,P(27)0.05,与模型组比较,寒痉汤组、麻辛附组基因表达升高,P(27)0.05或0.01,与寒痉汤组比较,止痉组基因表达降低,P(27)0.05。血管平滑肌细胞松弛素受体2基因表达,与正常组比较,模型组基因表达降低,P(27)0.05,与模型组比较,寒痉汤组、麻辛附组和止痉组基因表达升高,P(27)0.05或0.01,与寒痉汤组比较,麻辛附组、止痉组基因表达降低,P(27)0.05。结论:1.寒冷刺激可降低血管平滑肌细胞解偶联蛋白2和松弛素受体2的表达。2.寒痉汤可升高寒冷刺激血管平滑肌细胞解偶联蛋白2和松弛素受体2的表达。3.寒痉汤较其拆方麻黄细辛附子汤、止痉散升高血管平滑肌细胞解偶联蛋白2和松弛素受体2的效果更好。
【学位授予单位】：河北中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【参考文献】