文冠木化学成分、含量测定及酪氨酸酶抑制作用研究

发布时间：2020-03-30 01:18

【摘要】：目的:文冠木为无患子科文冠果Xanthoceras sorbifolia Bunge的干燥茎干或枝条的木部。多生于海拔52~2260 m的山坡丘陵等处,各地也常栽培种植。我国主产于北部的内蒙古、东北部的辽宁等地。文冠木为蒙医常用药材,蒙药名为西拉·森登。味甘、微苦,性凉,能祛风湿,消肿止痛,敛干黄水,主要用于治疗风湿性关节炎,风湿内热,皮肤风热等症。文冠木中主要包括三萜类(triterpenoids)、黄酮类(flavone)、酚酸类(phenolic acids)、甾体(sterides)等化学成分。文冠木具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等诸多药理活性,并在美白、改善学习记忆功能、治疗心血管疾病等方面广泛应用。因此,本文拟对文冠木进行系统的植物化学成分研究,在此基础上富集含量较高的成分,建立了测定其中6种化学成分的含量和其总黄酮的含量的方法并考察其提取工艺。考察其醇提物、萃取部位、10种单体化合物对酪氨酸酶抑制作用的影响。旨在丰富文冠木化学成分的类型的同时,为文冠木药材的质量控制和开发利用提供了有效的科学依据。方法:本研究采用常压硅胶柱色谱、HP-20型大孔吸附树脂、Sephadex LH-20柱色谱、ODS等色谱技术从文冠木的70%乙醇提取物中分离得到24个单体化合物,目前利用现代波谱技术(UV、IR、MS、NMR及HMBC、HSQC等)和理化方法鉴定了其中17个化合物的结构。植化研究表明,文冠木中含有大量的以杨梅素为主的黄酮类成分,本研究建立了以杨梅素(myketin)为对照品,采用紫外分光光度法测定文冠木总黄酮含量的方法,并单因素优选了总黄酮的提取工艺。本研究同时建立了高效液相色谱法同时测定文冠木中表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、二氢杨梅素、二氢槲皮素及杨梅素6种主要活性成分的含量测定方法,对色谱条件和提取工艺进行了全面优化,并测定了9批文冠木药材中以上6种成分的含量。采用酶标分析仪测定了本研究分离得到的文冠木单体化合物山奈酚、杨梅素、槲皮素、柚皮素、圣草酚、二氢槲皮素、二氢杨梅素、二氢山奈酚、5,7,3',4',5'-五羟基二氢黄酮、七叶内酯化学成分酪氨酸酶活性的抑制率。结果:本研究对文冠木醇提取物的乙酸乙酯部位和正丁醇部位分别进行分离、纯化得到24个化合物并鉴定了其中17个化合物,包括:9个黄酮类化合物为山奈酚(1)、槲皮素(2)、杨梅素(3)、柚皮素(4)、圣草酚(5)、二氢山奈酚(6)、二氢槲皮素(7)、二氢杨梅素(8)、5,7,3',4',5'-五羟基二氢黄酮(9);4个酚酸类化合物为原儿茶酸(11)、表没食子儿茶素(13)、儿茶素(14)、(-)-epicatechin-5-O-β-D-glucopyrnaoside(15),1个直链羧酸类化合物为[(9S,10R,11E,13R)-9,10,13-trihydroxyoctadec-11-enoic-acid)](10);1个香豆素类化合物是七叶内酯(12);2个甾体类化合物:β-谷甾醇(16)、胡萝卜苷(17)。本实验测定文冠木总黄酮的含量,结果表明总黄酮类含量为14.62~39.93 mg·g~(-1),同时测定了文冠木中6种化学成分的含量,结果表明,表没食子儿茶素的含量为2.01~7.10 mg·g~(-1)、儿茶素的含量为0.11~1.37 mg·g~(-1)、表儿茶素的含量为1.33~4.26mg·g~(-1)、二氢杨梅素的含量为1.06~5.42 mg·g~(-1)、二氢槲皮素的含量为0.03~0.95mg·g~(-1)、杨梅素的含量为0.05~1.40 mg·g~(-1)。本文首次采用酪氨酸酶抑制法考察了文冠木中10种单体化合物的酶活性抑制率,结果表明除二氢槲皮素、圣草酚,有促进酪氨酸酶活性的作用,其余所测成分均有抑制酪氨酸酶活性的作用。结论:化合物1、4、9、11~12,15均为首次从文冠木中分离得到。化合物5~6,10首次从本种本属分离得到。本实验测定文冠木总黄酮含量,同时测定了文冠木中6种化学成分的HPLC含量。这两种方法简单,准确,重复性好,可用于文冠木黄酮类化合物的定量研究。本实验发现绝大多数黄酮类化合物均具有酪氨酸酶抑制作用,为今后进一步研究黄酮类化合物的对酪氨酸酶活性的影响奠定了基础。
【图文】：

流程图,流程图,提取分离

文冠木提取分离流程图

HPLC色谱,混合对,药材,学位论文

内蒙古医科大学硕士研究生学位论文（2019） 29却至室温后加甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液过 0.45 μm 微孔滤膜，即得。2.2 色谱条件色谱柱：Inertsil ODS-SP HPLC Column (Japan)(250 mm ×4.6 mm，，5 μm)；流动相：乙腈(A)～0.4 %乙酸水(B)(0～20 min，10%～20%A； 20～40 min，20%～30%A)；流速：1 mL·min-1；检测波长：280 nm；柱温：20℃。此条件下文冠木6 种成分分离情况如下图 2-1：
【学位授予单位】：内蒙古医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284

【相似文献】