希望液对臭氧致衰老大鼠肝损伤保护作用的实验研究

发布时间：2020-03-30 03:28

【摘要】：目的:老龄化是大多数慢性病的主要危险因素之一,过去一个世纪,社会经济发展显著,医疗卫生事业进步,人类的寿命一直在稳步增加,致使世界老年人口急剧增长,而衰老引起的肝脏形态和分子学的改变,影响高龄患者的肝脏功能和肝脏的药物代谢,增加各种肝脏疾病的风险,作为不良预后因素,导致死亡率上升,因此,更多地了解老化的分子机制,制定可以阻止老化诱发的肝脏疾病进展的治疗策略尤为重要。实验通过吸入臭氧造成大鼠衰老模型,通过生化指标、病理切片、蛋白质组学研究探究衰老大鼠肝脏损伤情况以及中药复方希望液对衰老大鼠肝损伤的保护作用。方法:48只雄性SD大鼠,随机分为6组,每组8只。空白组吸入新鲜空气10h/d×45d,灌胃(ig)饮用水;造模组吸入臭氧(1.2±0. 2 ppm) 10h/d×45d,其中模型组每日灌胃饮用水,各给药组同步灌胃维生素E (13. 5mg/kg)与希望Ⅰ号液(45, 90,180 mg/kg)治疗。造模45天取材,取大鼠肝脏。检测肝脏组织匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)含量;HE染色观察组织细胞形态;蛋白质组学方法检测差异蛋白并对具有显著差异的蛋白质进行相关生物过程、分子功能、细胞成分和生物信号通路的聚类分析。结果:模型组大鼠较空白组肝脏组织匀浆MDA含量升高(P0. 01 ),CAT、SOD和GSH-Px含量降低(P0. 01);肝细胞数量减少,细胞体积和细胞核却代偿性增大,大小不一,排列稀松,部分肝细胞胞浆出现脂肪样变性,肝细胞核染色质浓缩;与肝脏结构、代谢、功能及调控有关的多条通路相关蛋白发生显著差异变化,与空白组相比,模型组149个差异蛋白显著上调,126个差异蛋白显著下调。给予希望液后,较模型组MDA含量降低(P0.01),CAT、SOD和GSH-Px含量升高(P0.01),组织形态观察明显脂肪样变性,细胞排列致密,肝血窦体积回升,肝细胞排列规则,少有淋巴细胞聚集,与模型组相比,希望液组172个差异蛋白显著上调,140个差异蛋白显著下调,与肝脏结构、代谢、功能及调控有关的多条通路相关蛋白显著回调。结论:臭氧可破坏大鼠肝脏组织结构,诱发多通道蛋白差异性改变,影响分子表达,希望液能够回调吸入臭氧致衰老大鼠肝损伤引起的SOD、GSH-Px、CAT含量下降及MDA含量上升,修复肝脏组织结构和形态变化,并通过调节与肝脏组织结构、功能、代谢等相关的多条通路,阻止氧化应激,建立内环境新稳态,对于臭氧引起衰老大鼠的肝脏损伤具有保护作用。
【图文】：

染色质浓缩；阳性药组部分肝细胞排列欠规则，肝细胞出现肿胀，肝细胞细胞核仍居中，逡逑少有淋巴细胞聚集；希望液低、中、高剂量组上述情况减轻，无明显脂肪样变性，，细胞逡逑排列致密，肝血窦体积回升，肝细胞排列规则，少有淋巴细胞聚集，结果见图１。逡逑形态计量结果显示，与空白组比较，模型组肝细胞体积比升高（Ｐ＜0．邋０１）；与模型逡逑组相比，维生素Ｅ组和希望液低、中、高剂量组肝细胞体积比回降（Ｐ＜０．邋０１），结果见逡逑表２。逡逑１７逡逑

其中模型组与空白组相比显著变化的蛋白共２７５个，利用ＫＥＧＧ共富集出通逡逑路１４条，主要有蛋白质消化和吸收、胰腺分泌、视黄醇代谢、药物代谢－细胞色素Ｐ４５０、逡逑代谢途径、酪氨酸代谢、核糖体，见图２。逡逑ＫＥＧＧ－ＰＡＴＨＷＡＹ逡逑Ｐｅｎｔｏｓｅ邋ａｎｄ邋ｇｌｕｃｕｒｏｎａｔｅ邋ｉｎｔｅｒ邋ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｓ邋ｗｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍ逡逑Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ邋ｏｆ邋ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃｓ邋ｂｙ邋ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ邋Ｐ４５０邋ｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍ逡逑Ａｓ邋ｃｏ邋ｒｂａｒｅ邋ａｎ邋ｄ邋ａｌ邋ｒａｔｅ邋ｍｅｔａ邋ｂ邋ｏｌ邋ｅ邋ｒｒ：邋■■■■■■■■■■■■■逡逑Ｒｉｂｏｓｏｍｅ邋ｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍ逡逑Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ邋ｐａｔｈｗａｙ－邋ｍｍｍｍｍｍａｍｍｍｍａｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍ逡逑Ｒｅｔｉｎｏｌ邋ｍｅｔｄｂｏｌｅｒｒ邋ｗｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍ逡逑Ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ邋ａｎｄ邋ａｂｓｏｒｐｔｉｏｒ邋厂丨…■■邋逦：逦１逦■邋■邋１邋■逦■邋逦邋｜逦逦逦邋）逡逑０逦１逦２逦３逦４逦５逡逑－ｌｏｇ邋Ｐ－ｖａｌｕｅ逡逑图２模型组比空白组显著变化蛋白ＫＥＧＧ信号通路富集逡逑对差异蛋白进行分析，发现差异蛋白主要涉及肝细胞的形态，代谢，机能及其核受体逡逑调控，富聚于多条通路。模型组肝细胞损害的蛋白组学特征，即实验方案中，与空白组比逡逑较，模型组动物，即大鼠吸入臭氧后的肝损伤特征。逡逑３．邋３．邋１．邋３．邋１模型组与空白组相比肝细胞结构相关蛋白的主要变化逡逑嘌呤代谢途径：参考ＫＥＧＧ嘌呤代谢途径
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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本文编号：2606960