黄连素对肝纤维化的防治作用及其机制研究

发布时间：2020-03-31 08:35

【摘要】：目的采用四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型和人源肝星状细胞系LX-2细胞模型,探讨黄连素防治肝纤维化的作用及其分子机制。方法预防性给药研究中将C57BL/6小鼠分为正常组、肝纤维化组、黄连素预防组,治疗性给药研究中将C57BL/6小鼠分为正常组、肝纤维化组、黄连素治疗组。腹腔注射四氯化碳诱导肝纤维化动物模型,黄连素预防组在造模的同时给予黄连素治疗6周。黄连素治疗组在造模3周后给予黄连素治疗。6周后测定丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)活性,HE染色和天狼猩红染色观察肝脏病理形态学改变,测定羟脯氨酸含量,免疫组化法检测肝脏α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和CD68的表达,同时用Western blot和q-PCR检测肝脏中α-SMA、I型胶原α1(collagen,type I,alpha 1,Col1α1)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase 1,TIMP-1)、白细胞介素(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。细胞实验中采用Western blot检测α-SMA、Col1α1、TGFβ1、p-Smad2、p-p65、NOX4的表达,免疫荧光检测p65入核情况。结果与肝纤维化模型组相比,黄连素预防组和治疗组均能使肝脏损伤和纤维化程度明显减轻,胶原合成和沉积减少,炎性反应减轻,ALT和AST活性下降,纤维化指标α-SMA、OPN、Col1α1、TIMP-1表达减少,炎性指标CD68、IL-1β和TNF-α表达减少。细胞实验中检测黄连素下调α-SMA、Col1α1与TGFβ1的表达,下调p-Smad2、p-p65、NOX4的表达,抑制p65入核。结论黄连素通过抑制炎症和氧化应激,减少胶原沉积,达到防治小鼠肝纤维化的效应。
【图文】：

黄连素,肝纤维化,免疫组化,病理形态学

18图 1 黄连素干预肝纤维化的病理形态学结果，HE 染色、天狼猩红染色、免疫组化。*P<0.05**P<0.01，***P<0.001 vs CCl4组。Fig.1. Berberine protects against liver fibrosis in mice and the pathological characteristics，HE staining，，Sirius red staining，and IHC. *P<0.05, **P<0.01 ,***P<0.001 vs CCl4group.

指标,黄连素,肝组织,肝血窦

AST 酶活力值均明显升高；与模型组比较，黄连素预防组的 ALT，AST 酶活力值均明显降低（P<0.01）。如图2C 所示，黄连素预防组与模型组比较，肝组织的羟脯氨酸含量，明显降低（P<0.05）。图 2 小鼠血清 ALT，AST 指标及肝脏羟脯氨酸含量。 *P<0.05, **P<0.01 vs CCl4组。Fig.2. The levels of ALT, AST and hydroxyproline content in mice. *P<0.05, **P<0.01 vs CCl4group.2.4.1.6 肝组织中 CD68 的表达如图 3A 和 B 所示，正常组肝组织中 CD68 蛋白免疫组织化学染色阳性表达水平较低，主要分布在肝血窦；模型组的阳性表达升高，除在肝血窦中表达，还有表达在汇管区和纤维间隔；黄连素预防组的 CD68 阳性表达则明显降低（P<0.05）。2.4.1.7 肝脏中 IL-1β、TNF-α 炎症基因表达水平如图 3C 和 D 所示，与正常组比较，模型组肝脏中 IL-1β、TNF-α 表达明显上调；黄连素预防组与模型组比较，两者则明显下调（P<0.01）。
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】