金丝桃苷靶向YY1复合体的抗肿瘤作用研究

发布时间：2020-04-06 12:10

【摘要】：EMT是肝癌转移中至关重要的过程。QKI是STAR家族的RNA结合蛋白,能够促进肿瘤的EMT,但QKI在肝癌中的激活机制现在尚不明确。YY1是与肿瘤的侵袭和转移相关的转录因子,数据库预测发现YY1能够结合QKI的启动子。我们试图阐明在肝癌中YY1对QKI的调控机制,并以此为靶点开发一种新型的治疗方法和手段。本研究首先分析了QKI在肝癌中的表达情况及与预后的关系,临床数据分析发现QKI在肝癌里高表达,且QKI高表达的病人预后差。同时,通过FPLC和Co-IP等蛋白互作实验发现YY1,p65和p300能形成转录复合体,进一步的实验发现YY1结合到QKI的超级增强子,p65结合到QKI的启动子上,借助p300的侨联作用形成一个稳定的三元复合体,激活QKI的转录,并进一步的促进肝癌的侵袭和转移。另外,利用虚拟筛选,我们筛选出了YY1复合体的界面互作抑制剂金丝桃苷,进一步细胞水平和动物水平的实验证明金丝桃苷能有效抑制YY1复合体的活性,抑制QKI的表达,进一步抑制肝癌的侵袭和转移,从而达到抗肿瘤的效果,为肝癌的治疗提供了新方向。
【图文】：

QKI在代谢方面的作用第三节YY1和p65的研究进展

3.加入细胞裂解液 50 μl，660 rpm 震荡 15 min。4. 将各孔中的细胞裂解液取 45 μl 转移至白板中，每孔内加入 50 μl 萤火物，660 rpm 震荡 10 s，酶标仪检测光吸收值 3 次。5. 加入 50 μl Stop&Glo 底物，660 rpm 震荡 10 s 后酶标仪检测光吸收。1.3 实验结果1.3.1 YY1 对 QKI 的调控初步验证为了探讨 YY1 对 QKI 的调控机制，首先在 Chipbase 数据库中分析发现 Y够直接结合 QKI 启动子，Chip-PCR 结果也表明 YY1 可以成功钓取 QKI，如图 2.1A。接下来在 PLC-PRF-5，HepG2，，SMMC-7721 三种细胞系中，利荧光素酶报告基因系统检测了 YY1 对 QKI 的调控作用，结果显示在五种肝胞系中 YY1 对 QKI 均有不同程度的上调作用，其中在 PLC-PRF-5 中的调用最为明显（图 2.1 B）。
【学位授予单位】：南开大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

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本文编号：2616494