油酸通过诱导凋亡和自噬抑制舌鳞癌细胞增殖机制的研究

发布时间：2020-04-18 02:47

【摘要】：目的:油酸是中药鸦胆子油的主要成分之一,被报道对多种肿瘤具有明显的抗癌作用。本课题旨在探究油酸(OA)对舌鳞癌细胞(TSCC)增殖的作用机制。方法:我们通过CCK8、Edu实验及建立舌鳞癌裸鼠移植瘤模型从体外、体内两方面观察OA对TSCC增殖的作用;同时利用流式细胞仪检测OA作用后TSCC细胞周期的变化;再应用Annexin V-FITC细胞凋亡实验、TUNEL实验、透射电镜观察OA作用后TSCC凋亡和自噬;Western Blot、免疫组化实验进一步验证相关蛋白的变化。结果:1.体内外实验均证实OA能够有效的抑制TSCC的增殖且具有时间和剂量依赖性;2.OA作用后CyclinD1表达降低,TSCC周期停滞在G0/G1期;3.细胞凋亡结果显示:与对照组相比,OA处理后凋亡细胞增多,Bcl-2的表达量降低,p53和cleaved-capase-3的表达升高,表明OA能够诱导TSCC凋亡;4.自噬结果显示:与对照组相比,加入OA后TSCC细胞中可观察到自噬溶酶体,p62的表达量降低,LC3-I/LC3-II比值减小,表明OA可以诱导TSCC发生自噬;5.与对照组相比,OA降低TSCC中p-Akt,p-mTOR,p-S6K,p-4E-BP1和p-ERK1/2的表达,表明OA抑制TSCC中Akt/mTOR信号通路。结论:OA抑制TSCC增殖的机制可能是通过抑制Akt/mTOR通路诱导其自噬和凋亡。因此OA可能可以作为一种潜在的抑制舌鳞癌增殖的抗癌药物。
【图文】：

油酸,实验检测,倍增时间,抑制率

第 3 章实验结果第 3 章实验结果3.1 油酸抑制舌鳞癌细胞的增殖我们通过 CCK8 实验观察 OA 对舌鳞癌细胞（CAL27，UM1）增殖的作用。如图 3.1 所示：随着 OA 浓度的增高，OA 对舌鳞癌细胞抑制率逐渐增高；在同一浓度下，，随着作用时间的延长，OA 对舌鳞癌细胞抑制率也逐渐增高，表明OA 在体外可以抑制舌鳞癌细胞的增殖，并呈时间和剂量依赖性。表 3.1 结果显示：OA 作用舌鳞癌细胞 CAL27 和 UM1 的半抑制浓度（half maximal inhibitoryconcentration，IC50）值分别是 291~228μM 和 159~78μM。表 3.2 结果显示：OA作用于舌鳞癌细胞后，舌鳞癌细胞的倍增时间延长。CAL27 倍增时间从 69.1h延长到 126.8h，UM1 倍增时间从 67h 延长到 90.7h，细胞增殖速度减慢。从 CCK8实验结果得出 OA 可以抑制舌鳞癌细胞的增殖且呈时间和剂量依赖性。

油酸,红色荧光,实验验证,占比

16图 3.2 Edu 实验验证油酸抑制舌鳞癌细胞的增殖（a）：红色箭头指示增殖的舌鳞癌细胞，如图示红色荧光逐渐减少表示舌鳞癌细胞增殖受到抑制。（b）：统计学分析随着 OA 浓度的逐渐增高，舌鳞癌细胞增殖率逐渐下降（*p<0.05,**p<0.01, ***p<0.001 ）。3.2 油酸对舌鳞癌细胞周期的影响为了进一步探讨 OA 对舌鳞癌细胞周期的影响，如图 3.3 a 所示：随着 OA浓度的不断增加，舌鳞癌细胞增殖被抑制，大部分细胞停滞在 G0/G1 期。图 3.3b-c 显示：CAL27 细胞 G0/G1 期的占比从 50.28±0.78%增加到 62.21±3.38%，G2/M期占比从17.87±1.57%减少到5.41±0.56%，UM1细胞的G0/G1期的占比从45.36±1.50%增加到 62.88±0.59%，G2/M 期占比从 9.43±0.95%减少到 2.26±0.30%，两株细胞S期的占比均无明显变化。表明OA可以将舌鳞癌细胞周期阻滞在G0/G1。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

【参考文献】