艾叶提取物对几种筛选分离微生物生长抑制效应的评价

发布时间：2020-04-29 23:33

【摘要】：艾叶作为一种中草药既有药用也有食用价值,也是一种广谱抗菌抗病毒的药物,对很多病毒和细菌都有抑制和杀伤作用,对呼吸系统疾病有一定的防治作用。尽管艾草的价值已经被大家所熟知,也开发出了很多关于艾叶的产品,但是对于艾叶提取物是否能够可以用来作为保健品和杀灭微生物中药剂还没有系统和相关的报道。为了详细的研究艾叶提取物是否可以用于日常健康护理和脚气治疗,我们开展了本课题研究。首先,采集所要处理的微生物对象。携带密封好的培养细菌和真菌生长的固体培养基的平板到南阳市区不同的采集地点(南阳师范学院、南阳姜营机场、南阳体育场以及南阳市新华城市广场),利用空气沉降法收集空气中所含的细菌和真菌,然后带回实验室培养和分离相关菌株。用灭菌双蒸水浸泡法筛选脚气相关细菌和真菌并进行分离培养。从大约60盘培养基上挑选出28株菌株进行微生物类别鉴定,得到的菌株包含细菌18株,真菌10株,通过对这些菌株的16S和ITS保守序列进行PCR扩增并测序,以及通过BLAST比对分析发现这28株菌株细菌包括杆菌、单胞菌等,其中杆菌占90%。而真菌则包含草酸青霉、棘孢曲霉、链格孢菌等,其中F-HZJ1、F-HZJ2和F-ZBJ2都为草酸青霉。根据各种菌株的特性和出现的频度,从这些分子鉴定完成的菌株中选取10种菌株作为研究的菌株对象,其中细菌6种,分别为B-JQ(鲍曼不动杆菌)、B-SY(巨大芽孢杆菌)、B-SY7(嗜根寡养单胞菌)、B-JC1(枯草芽胞杆菌)、B-XH1(解淀粉芽孢杆菌)和B-SYS2(大肠杆菌);真菌4种,分别为F-HZJ2(草酸青霉)、F-SY1(细极链格孢)、F-SYS1(扩展青霉菌)、F-JC3(枝孢样枝孢霉)。其次,通过去离子水浸提法得到的艾叶提取物BEA、索式提取法获得SEA艾叶提取物以及购买的商业化CEA艾叶提取物对10种供试菌株进行抑菌率的测定,经过水煮浸提取液对菌的抑制效果表型观察确认艾叶提取物对这些微生物的生长有抑制影响。最后,通过详细的生理测定和数据统计对艾叶提取物对分离的几种微生物生长抑制效应进行作用分析。研究发现不同的提取方法和处理方法对菌有不同的抑制效果,三种提取物产生了不同的抑菌效果,BEA对细菌有明显的抑制作用,而对真菌的作用不太明显。SEA和CEA两种提取物对本实验10种供试菌都有一定的抑制作用,SEA和CEA对4种真菌的抑制效果要强于6种细菌。不同浓度的SEA和CEA对不同的菌种有不同的抑制效果,但是总体上SEA提取物对菌的抑制效果要比CEA的抑制效果好,SEA和CEA提取物对鲍曼不动杆菌、草酸青霉有更好的抑制效果;基本上SEA和CEA提取物浓度在25 mg/ml对供试细菌都产生了抑制作用,浓度在15mg/ml开始对真菌有抑制效果;SEA对草酸青霉的抑制效果要强于其他三种,其MIC为30 mg/ml,而对细极链格孢、扩展青霉菌、枝孢样枝孢霉的MIC都是40 mg/ml;从SEA对CSA提取物对6种细菌生长抑菌圈直径的百分比21.3%、16.9%、15.4%、9.2%、9.5%、10.5%来看,也表明SEA的抑菌效果要比CEA的抑菌效果要强些;在对真菌的抑菌率测定中,SEA对四种真菌的抑菌率在60%左右,CEA对四种真菌的抑菌率在50%左右。
【图文】：

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图 2-1 购买的两年陈艾草叶和艾叶提取物Fig 2-1 Two years old leaves of Artemisia argyi and extract of Artemisia argyiA、放置了两年的艾叶 B、网上购买的艾叶提取物用实验试剂NA Marker 2000 bp 北京索莱宝科技有限公司×Taq plus Mix 南京诺唯赞生物科技有限公司oldview 北京索莱宝科技有限公司oading Buffer 北京索莱宝科技有限公司菌 DNA 提取试剂盒生工生物工程有限公司收胶试剂盒赛默飞世尔科技（中国）有限公司酸凝胶配制[54]：配制浓度为 1%的核酸凝胶，量取 100 ml 的 1 TAE 加入称的琼脂糖，在微波炉加热使其融化变为清亮透明液体即可。轻轻摇匀后待温℃左右加入 2 μl Goldview，，轻轻摇匀倒入插上梳子的胶板待胶凝固后备用。
【学位授予单位】：南阳师范学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285

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