芝麻素和维生素E联用对自发性高血压大鼠心肌纤维化的保护作用及机制

发布时间：2020-05-05 18:44

【摘要】：目的:探讨芝麻素(Sesamin,Ses)和维生素E(Vitamin E,Vit E)联用对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rat,SHR)心肌纤维化的保护作用及机制。方法:采用SPF级14周龄雄性自发性高血压大鼠32只,体重(270±20g),随机分为Ses和Vit E联用(160+10mg/kg/d,n=8)组、Ses(160mg/kg/d,n=8)组、Vit E(10mg/kg/d,n=10)组及SHR(0.5%羧甲基纤维素钠,3.2ml/kg/d,n=8)组。另设WKY正常对照(0.5%羧甲基纤维素钠,3.2ml/kg/d,n=8)组,每日灌胃给药一次,持续10周。大鼠在给药前和给药后每两周以尾袖法对其测定一次收缩压;末次给药后取腹主动脉血,测定心肌酶谱;取心脏,计算脏器指数;比色法测定血清及心肌组织NO、MDA、SOD、T-AOC和H2O2的含量;碱水解法检测心肌组织羟脯氨酸的含量;HE染色和Masson染色分别观察心肌病理学和胶原沉积的变化;免疫组化法表达心肌iNOS和TGF-β1阳性细胞及蛋白;real-time PCR检测心肌TGF-β1、collagenⅠ和collagenⅢmRNA表达;Western blot观察心肌collagenⅠ、collagenⅢ、p22phox、p47phox、iNOS、TGF-?1、CTGF、TIMP-1、MMP-9、p-AKT和PI3K蛋白的表达。结果:(1)SHR组大鼠收缩压明显高于WKY组(P0.01),各用药组大鼠收缩压较SHR组均有不同程度的降低(p0.05或p0.01),且ses和vite联用组大鼠收缩压明显低于单一用药组(p0.05或p0.01)。(2)shr组大鼠心脏脏器指数和左心室指数明显高于wky组(p0.05或p0.01),各用药组大鼠心脏脏器指数和左心室指数较shr组大鼠均不同程度的降低(p0.05或p0.01),与单一用药组比较,ses和vite联用组心脏脏器指数和左心室指数下降更明显(p0.05或p0.01)。(3)he和masson染色结果显示shr组大鼠心肌细胞肥大,细胞排列紊乱,间隙增宽,出现细胞外基质增生,胶原沉积;给予ses和vite治疗后,上述病理变化都有不同程度的改善,且ses和vite联用组比单一用药组改善更为明显。(4)shr组大鼠心肌酶谱指标明显高于wky组(p0.01);各给药组心肌酶谱指标均有不同程度的降低,且联用组较单一用药组下降更为明显(p0.05)。(5)shr组大鼠血清及心肌组织no、mda、h2o2较wky组大鼠含量明显升高(p0.01),t-aoc、sod含量显著降低(p0.01);各给药组大鼠较shr组大鼠血清及心肌组织no、mda、h2o2较wky组大鼠含量明显降低,t-aoc、sod含量明显升高(p0.01);ses和vite联用组较单用药组降低shr血清及心肌组织no、mda、h2o2含量,升高t-aoc、sod含量更为显著(p0.01)。(6)shr组大鼠心肌组织hyp含量较wky组明显升高(p0.01),各用药组大鼠较shr组大鼠心肌组织hyp含量显著降低(p0.01);ses和vite联用组大鼠心肌组织hyp含量较单用组明显降低(p0.05)。(7)免疫组化结果显示,shr组大鼠心肌组织inos和tgf-β1阳性细胞表达较wky组大鼠明显上调(p0.01),而各用药组大鼠心肌组织inos和tgf-β1阳性细胞表达明显降低(p0.05或p0.01),ses和vite联用组与单用药组比较,大鼠心肌组织inos和tgf-β1阳性细胞表达显著降低(p0.01)。(8)real-timepcr检测结果发现,shr组大鼠心肌tgf-β1、collagenⅠ和collagenⅢmrna表达水平显著升高(p0.01),各给药组大鼠心肌tgf-β1、collagenⅠ和collagenⅢmrna表达水平明显下降(p0.01),且联用组大鼠心肌tgf-β1、collagenⅠ和collagenⅢmrna表达水平下降更为明显(P0.01)。(9)Western blot法检测结果显示,SHR组大鼠较WKY组大鼠心肌collagenⅠcollagenⅢ、p22phox、p47phox、iNOS、TGF-?1、CTGF、TIMP-1、MMP-9、p-AKT和PI3K、蛋白的表达明显上调(P0.01),而各给药组大鼠上述各蛋白表达均有不同程度的下调(P0.05或P0.01),且联用组较单用组下调效果更为明显(P0.05)。结论:Ses和Vit E联用具有协同保护自发性高血压大鼠心肌纤维化的作用,且效果比单用Ses或Vit E更佳;其机制可能与Ses和Vit E降低血压、对抗氧化应激,下调TGF-β1过表达,抑制其下游信号系统的激活有关。
【图文】：

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皖南医学院硕士学位论文3. 芝麻素和维生素 E 联用对 SHR 心肌 HE 染色的影响光镜下，HE 染色结果显示 WKY 组大鼠心肌细胞呈梭型，形态正常，排列整齐，结构清晰，未见细胞肥大和细胞间隙改变，细胞核染色清楚。SHR 组大鼠心肌细胞明显形态改变，出现肥大和排列紊乱，且细胞间隙增宽，细胞核也出现增大深染，提示心肌细胞已有病理损伤。当给予 Ses 和 Vit E 治疗后，心肌细胞的形态均有不同程度的改善且Ses 和 Vit E 联用效果更为明显，说明 Ses 和 Vit E 对 SHR 心肌细胞的病理损伤有一定的保护作用（图 3）。

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图 4 芝麻素和维生素 E 联用对 SHR 心肌 Masson 染色的影响（200×）Figure 4 Effect of sesamin combined with vitamin E on Masson staining in myocardialof SHR（200×）注：A：WKY ；B：SHR；C：Ses+Vit E；D：Ses； E：Vit E5. 芝麻素和维生素 E 联用对 SHR 心肌酶谱的影响与 WKY 组相比，SHR 组 AST、CK、CK-MB、LDH 和 HBDH 明显增加（P<0.05或 P<0.01）；与 SHR 组相比，Ses+Vit E 组 AST、CK、CK-MB、LDH 和 HBDH 明显下降（P<0.05 或 P<0.01），，Ses 组 CK、CK-MB、LDH 和 HBDH 明显降低（P<0.05 或 P<0.01），Vit E 组 CK、CK-MB、LDH 和 HBDH 明显降低（P<0.05）；与 Ses+Vit E 组相比，Ses组 LDH 明显升高（P<0.05），Vit E 组 AST、CK-MB、LDH 明显增加（P<0.05 或 P<0.01）。提示 Ses 和 Vit E 联用对 SHR 心肌功能损伤具有一定保护作用，其疗效优于单用 Ses 和Vit E（表 3）。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】