基于微透析技术研究通窍散瘀组分方制剂经鼻递药药代动力学

发布时间：2020-05-06 13:25

【摘要】：目的及意义通窍散瘀方为治疗缺血性脑中风的临床经验方,由葛根、白芍、薄荷组成,具有通窍醒脑,活血散瘀之功效,临床疗效确切,其主要药效成分为葛根素、芍药苷及薄荷脑。课题组前期成功制备了通窍散瘀组分方鼻用微乳制剂。本课题拟基于前期研究基础,以正常大鼠及嗅阻断大鼠为实验动物,对通窍散瘀组分溶液和通窍散瘀组分微乳经鼻递药的药动学行为进行对比,深入研究制剂处方配伍因素及剂型因素对药物脑靶向性及生物利用度的影响,进一步为“鼻通脑络”中医理论提供实验佐证,为中药复方纳米经鼻递药系统的研发提供实验依据。研究方法本文利用微透析技术结合UPLC-MS/MS对通窍散疲组分方制剂经鼻递药药代动力学进行研究,具体研究内容如下:1.微透析探针回收率影响因素考察本实验建立葛根素与芍药苷的HPLC含量测定的方法,并对其进行方法学考察。采用建立的HPLC含量测定方法考察探针对测定药物(葛根素和芍药苷)的吸附性、探针回收率的稳定性以及灌流速度和药物浓度对探针回收率的影响。2.微透析探针体内回收率考察本实验建立了体内测定葛根素与芍药苷的UPLC-MS/MS的方法,并对其进行方法学考察。在体内植入脑探针和血液探针,脑探针的定位参照大鼠脑立体定位图谱,确定纹状体的位置,以前囟为基点,AP:+0.5mm,ML:±3mm,DV:-4mm处定位,血液探针沿向心室方向植入颈静脉,以生理盐水为灌流液,采用零净通量法测定探针在血液及脑部纹状体部位的在体回收率。3.通窍散瘀组分制剂体内药动学研究①通窍散瘀全方制剂正常大鼠体内药动学研究:以雄性SD大鼠为实验动物,设置通窍散瘀溶液组、通窍散瘀微乳组;将血液探针埋植于颈静脉,脑探针埋植于大脑纹状体部位;分别以相同的剂量(以葛根素7mg/kg计)鼻腔给药,微透析取样,UPLC-MS/MS检测透析液中药物浓度,以探针回收率对药物浓度进行校正,采用DAS 3.0软件进行非房室模型拟合得到药动学参数。②通窍散疲全方制剂嗅阻断大鼠体内药动学研究:对雄性SD大鼠嗅球部位进行破坏,制备嗅阻断大鼠模型。以嗅阻断大鼠为实验动物,设置通窍散瘀溶液组、通窍散瘀微乳组,进行药动学考察,研究方法同上。③通窍散瘀单组分制剂正常大鼠体内药动学研究:以雄性SD大鼠为实验动物,设置通窍散瘀单组分溶液组、通窍散瘀单组分微乳组,进行药动学考察,研究方法同上。实验结果1.微透析探针回收率影响因素考察本实验建立了葛根素与芍药苷的HPLC检测方法,方法学考察显示专属性、线性、精密度和稳定性均符合要求,可用于体外葛根素与芍药苷的含量测定。本实验通过考察探针对药物的吸附作用及探针回收率的稳定性,发现脑探针和血液探针及微透析系统对葛根素及芍药苷无吸附作用,且两种探针在5 h即整个体内实验过程中回收率基本保持稳定,说明选择的这两种探针可用于进一步的体内微透析实验。同时通过考察药物浓度及灌流速度对探针回收率的影响推断药物浓度对探针的回收率不产生影响。并通过考察灌流速度对探针回收率的影响,结合实际将后续在体实验中将流速设置为1.5μL/min。2.微透析探针体内回收率考察本实验以大豆苷元为内标物建立了葛根素与芍药苷的UPLC-MS/MS体内含测方法,方法学研究显示专属性、线性、精密度与准确度、稳定性均符合体内分析要求,可用于体内葛根素与芍药苷的含量测定。采用零净通量法测定探针在血液及纹状体部位的在体回收率,实验结果显示,葛根素脑探针的回收率为(54.61±0.30)%,血液探针的回收率为(36.81±0.17)%;芍药苷脑探针的回收率为(40.24±1.05)%,血液探针的回收率为(38.53±1.21)%。3.通窍散瘀组分制剂体内药动学研究3.1通窍散疲组分制剂正常大鼠体内药动学研究本部分结合微透析技术对通窍散瘀组分溶液剂和微乳剂正常大鼠经鼻递药后血液药动学与脑部药动学行为进行考察,结果发现与溶液剂相比,微乳制剂对葛根素与芍药苷血液中的生物利用度无影响,而可以显著提高脑部的生物利用度,增强药物在脑部的吸收。课题组开发的中药复方微乳制剂脑靶向性更好,对于脑中风的治疗具有重要的意义。3.2通窍散瘀组分制剂嗅神经阻断大鼠体内药动学研究本部分结合微透析技术对通窍散瘀组分溶液剂和微乳剂嗅阻断大鼠经鼻递药后药动学行为进行考察,并与正常大鼠的药动学行为进行对比。结果表明与正常大鼠相比,嗅阻断大鼠葛根素及芍药苷的AUC0.t显著性降低,表明嗅神经通路的存在能够增加葛根素及芍药苷在脑部的吸收。葛根素及芍药苷的脑靶向指数较正常大鼠均明显降低,表明嗅神经通路是经鼻递药后提高脑部生物利用度的重要途径,在鼻脑通路中具有重要的作用。3.3通窍散瘀单组分微乳正常大鼠体内药动学研究本部分结合微透析技术对通窍散瘀单组分微乳和单组分溶液正常大鼠经鼻递药后药动学行为进行考察,血液药动学结果表明与其他成分配伍能够提高葛根素的血液中生物利用度,降低芍药苷的血液生物利用度。脑部药动学结果表明,与其他成分配伍能够提高葛根素与芍药苷的脑部生物利用度。与单组分制剂相比,成分间的配伍能够提高制剂的脑靶向性。在中药复方经鼻递药系统中,配伍因素对于脑靶向性具有重要影响,对于脑部疾病的治疗具有重要作用。实验结论本课题结合微透析技术对鼻腔给药通窍散瘀组分制剂的体内药动学进行研究,结果发现课题组前期制备的中药复方微乳经鼻递药制剂能够明显提高脑靶向性,有利于对脑中风的治疗。考察了嗅神经通路在整个鼻-脑通路中的作用,表明嗅神经通路在整个鼻-脑通路中占据重要作用,对于药物的吸收具有显著影响;发现了鼻脑多通路的存在,进一步验证了“鼻通脑络”的中医理论。中药复方制剂中处方配伍因素影响药物经鼻入脑,对于中药复方纳米经鼻递药系统的研发具有重要意义。
【图文】：

Ａ：空白供试品Ｂ：葛根素和芍药苷混合对照品Ｃ：样品供试品逡逑图１．１．１葛根素与芍药苷的ＨＰＬＣ图谱（１号峰表示葛根素，２号峰表示芍药苷）逡逑２．４标准曲线的制备逡逑精密量取１邋ｍＬ葛根素储备液与１邋ｍＬ芍药苷储备液置于１０邋ｍＬ容量瓶中，加入生逡逑理盐水定容，即得混合对照品储备液。使用生理盐水将混合对照品储备液不断稀释，逡逑分别制备成葛根素浓度为邋４９．６５邋｜ｉｇ／ｍＬ、１９．８６邋ｐｇ／ｍＬ、９．９３０邋｜ｉｇ／ｍＬ、３．９７２邋ｐｇ／ｍＬ、０．９９３０逡逑ｌ＿ｉｇ／ｍＬ、０．４９６５邋ｐｇ／ｍＬ；苟药苷浓度为邋５０．０５邋ｆｉｇ／ｍＬ、２０．０２邋｜＿ｔｇ／ｍＬ、１０．０１邋｜ｊ＿ｇ／ｍＬ＇邋４．００４逡逑吨／ｍＬ、ＬＯＯｌ＾ｇ／ｍＬ、０．５００５｜ｉｇ／ｍＬ的系列浓度混合对照品溶液，按照“２．１”项下测逡逑定葛根素与芍药苷的ＨＰＬＣ条件对峰面积进行测定。以峰面积作为纵坐标，对应的葛逡逑根素或芍药苷的浓度作为横坐标进行线性回归，葛根素的回归方程：ｒ＝邋３０．２３ＪＴ邋＋逡逑０．７１６７，，邋ｒ＝ｌ，表明葛根素在０．４９６５明／ｍＬ－４９．６５邋＾ｇ／ｍＬ范围内线性关系良好；芍药苷逡逑的回归方程为：ｒ＝１２．５０Ｚ－０．３６２８，邋ｒ＝ｌ，表明芍药苷在０．５００５邋＾ｇ／ｍＬ－５０．０５明／ｍＬ范围逡逑

９．９３０逦２９７．０逡逑１９．８６逦５９６．２逡逑４９．６５逦１５０４．０逡逑表１．１．２芍药苷标准曲线的浓度及峰面积表逡逑浓度（ｐｇ／ｍＬ）逦峰面积逡逑０．５００５逦７．７逡逑１．００１逦１２．４逡逑４．００４逦５０．５逡逑１０．０１逦１２２．８逡逑２０．０２逦２４７．７逡逑５０．０５逦６２６．２逡逑葛根素逡逑２０００邋－逡逑
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R283.6;R285.5

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本文编号：2651337