雷公藤甲素促进Tat降解的机制研究

发布时间：2020-05-10 13:49

【摘要】：人类免疫缺陷病毒是艾滋病的元凶,病毒编码蛋白Tat在HIV-1的潜伏与激活中发挥着类似于“开关”的功能。以Tat调控功能为核心的研究对于HIV-1基因转录延伸机制的揭示以及开发艾滋病治疗的靶点新药物具有重要意义。雷公藤甲素(triptolide,TPL)作为一个著名的中草药成分,已经被用来治疗包括自身免疫病、癌症等在内的多种疾病,近来人们发现其在HIV-1方面的作用,本研究致力于揭示其引起Tat降解的机制,该机制研究将极大推进TPL在艾滋病方面的治疗。研究基于HIV-1转录细胞模型,对多个雷公藤来源活性成分进行筛选,发现TPL以时间、浓度依赖性抑制HIV-1的转录,并且TPL可以特异性引起HIV-1编码蛋白Tat的降解继而抑制HIV-1的转录。研究显示TPL不是通过阻断CycT1对于Tat的保护作用,也不是在转录、翻译水平影响Tat的含量,而是通过泛素蛋白酶体降解途径促进了 Tat的降解。为了寻找在该过程中起作用的E3泛素连接酶,运用亲和纯化、质谱、SILAC(稳定同位素标记氨基酸细胞培养)蛋白组学定量技术对Tat相互作用蛋白进行定量分析,共鉴定出1234种蛋白,其中包括12个E3泛素连接酶。需要指出的是,CUL4B不是在TPL处理时而是天然条件下引起Tat降解的E3泛素连接酶,而且TPL不是通过单一位点的泛素化引起Tat的降解。
【图文】：

能指,激酶,前病毒,辅因子

图１．１邋Ｐ－ＴＥＦｂ在Ｔａｔ激活的ＨＩＶ－ｌ的转录中起重要作用州逡逑关于Ｐ－ＴＥＦｂ在帮助ＲＮＡ邋ＰｏｌＩＩ方面的作用并不能指示其在ＨＩＶ－丨转录方面的逡逑作用，因为Ｐ－ＴＥＦｂ只是基因转录过程中所需要的众多转录因子的一员。但逡逑有任何真核生物或病毒的基因要比ＨＩＶ－１病毒基因对于Ｐ＿ＴＥＦｂ的使用如此逡逑ｌ３９，４°］，ＨＩＶ－１采用了一种非常精细复杂的方式来捕捉和招募宿主细胞的逡逑ＥＦｂ来转录ＨＩＶ－１前病毒ＤＮＡ，因此，对于从ＨＩＶ－１邋ＬＴＲ起始的转录，Ｐ－ＴＥＦｂ逡逑为一种特殊的辅因子在ＨＩＶ－１的转录过程中发挥着重要作用事实上，我们逡逑于Ｐ－ＴＥＦｂ激活Ｐｏｌ邋ＩＩ转录延伸的机制研究极大程度上得益于对于Ｐ－ＴＥＦｂ在逡逑Ｖ－１转录方面的调控。逡逑．２邋Ｐ－ＴＥＦｂ的负性调控机制逡逑ＣＤＫ激酶的活性都是受到其相应调控蛋白的严格调控的，ＣＤＫ９也不例外。逡逑表明，细胞内并不是所有的ＣＤＫ９－ＣｙｃＴｌ复合物都有激酶和转录活性，，有两逡逑

转录本,病毒,可替换性,暂停状态

图１．３邋ＨＩＶ－１编码的Ｔａｔ通过与ＨＩＶ－１邋ＴＡＲ结合激活全长转录本的形成ｌ２９这个过程中，一方面Ｔａｔ可以与ＣｙｃＴｌ结合招募Ｐ－ＴＥＦｂ到邻近的病毒ＲＴＡＲ上，另一方面，Ｔａｔ可以特异地与ＴＡＲ结合，ＣｙｃＴｌ也可以识别Ｔ的顶端环结构，所以在Ｔａｔ的帮助下，Ｔａｔ、ＴＡＲ和Ｐ－ＴＥＦｂ形成一种稳定的物，继而招募Ｐ－ＴＥＦｂ到邻近的处于暂停状态的Ｐｏｌ邋ＩＩ上，Ｔａｔ招募的Ｐ－ＴＥ磷酸化Ｐｏ丨ＩＩ的最大亚基ＣＴＤ（Ｃ－ｔｅｍ＾ｉｎａ丨ｄｏｍａ丨ｎ）、ＤＳＩＦ和ＮＥＬＦ，导致级联反应最终激活ＨＩＶ－１的转录延伸％７３，邋Ｗ。逡逑如之前提到的，存在大量的结构与功能的证据揭示了邋Ｔａｔ－ＴＡＲ－Ｐ－ＴＥＦｂ７ＳＫｓｎＲＮＰ之间有很多有趣的相似性。首先，Ｔａｔ上的精氨酸富集ＴＡＲ与ＨＥＸＩＭ１上与７ＳＫ结合基序具有功能可替换性Ｉ５３］。其次，ＴＡＲＲＮＡ上别结合的区域与７ＳＫＲＮＡ被ＨＥＸＩＭ１识别结合的区域在结构和功能上也近［７５］。最后，蛋白ＣｙｃＴｌ的ｃｙｃｌｉｎ－ｂｏｘ既可以被ＨＥＸＩＭ１又可以被Ｔａｔ结合［
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】