人参茎叶总皂苷和风味黑参的质量分析及药理活性研究

发布时间：2020-05-18 17:28

【摘要】：本篇论文主要对人参茎叶总皂苷(Toatal Ginsenoside of Ginseng stems and leaves SLG)及以大蒜作为人参的加工助剂得到的新的人参加工品——风味黑参(Flavored black ginseng FBG)进行研究。探讨SLG和FBG的质量及生物活性,其主要研究内容及结果如下:1、人参茎叶总皂苷和风味黑参的质量分析。首先采用高效液相法(HPLC)对SLG和FBG中20种人参皂苷含量进行测定,接着通过苯酚硫酸法、二硝基水杨酸(DNS)法、考马斯亮蓝法和HPLC法分别测定FBG中总糖、还原糖、蛋白和5-羟甲基糠醛的含量;最后,探索大蒜对FBG加工中人参皂苷转化的影响。结果可知:SLG中含20种人参皂苷含量总计69.99%,FBG中常见人参皂苷转化为人参皂苷Rk3、Rg5等稀有皂苷。同时,FBG中还原糖占总糖含量的92.06%,蛋白含量极低,并且5-羟甲基糠醛含量低至7.40mg/kg。从加工的时间和温度来研究大蒜作用时,发现大蒜有促进人参皂苷转化的作用,一次性高温高压加工时间越长,温度越高,越向极性低的人参皂苷转化。2、人参茎叶总皂苷的预防肥胖作用及机制研究。通过分组后边给高脂饮食(HFD)边给药的整体动物实验方法,研究SLG预防肥胖作用。实验结束后,取血清,脏器组织并计算脏器指数;根据试剂盒说明书测定血清中相关指标;采用质谱连用方法测定肌肉组织中酰基肉碱的含量;最后采用HE染色、免疫组化、蛋白质印迹(Western blot)和实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)的方法对肝脏和脂肪组织进行分析测定。结果显示:SLG可明显减少HFD诱导的C57BL/6肥胖小鼠的体重增加,减少脏器指数。与HFD相比,SLG降低游离脂肪酸(FFA)、瘦素(Leptin)、葡萄糖(Glucose)和胰岛素(Insulin)的含量,缓解血脂异常,调节酰基肉碱水平。此外,在肝脏组织中,SLG下调PPARγ、FAS、CD36和FATP2的表达,上调CPT-1、UCP-2、PPARα、HSL和ATGL的表达。同时,与HFD组相比,SLG降低脂肪组织中PPARγ、aP2和Leptin的mRNA水平,上调PPARα、PGC-1α、UCP-1和UCP-3的基因表达。由此可知:SLG在125-500 mg/kg范围内有明显的预防肥胖作用,其机理与促进线粒体的β-氧化、产热、抑制脂肪生成、促进脂肪降解和降低游离脂肪酸摄取有关。3、风味黑参及其多糖的抗肿瘤作用及机制研究。通过建立H_(22)荷瘤小鼠模型,研究FBG及其多糖的体内抗肿瘤作用。实验结束后,取血清、脏器和肿瘤组织并计算抑瘤率、脏器指数;根据试剂盒说明书测定血清中生理和细胞因子指标;最后采用HE染色、TUNEL染色、免疫组化、Western blot和RT-PCR方法对肿瘤组织进行测定。结果显示:FBG及其多糖(Flavor black ginseng polysaccharide FBGP)高剂量的抑瘤率分别为61.74%、57.84%,并且能够升高免疫器官指数和细胞因子含量,无明显毒副作用。此外,从HE染色、TUNEL染色、免疫组化、Western blot和RT-PCR分析中可以发现FBG及其多糖能够诱导肿瘤细胞凋亡,上调Bax和下调Bcl-2、VEGF的表达。因此,FBG及FBGP通过调节机体免疫功能、抑制血管生成、诱导肿瘤细胞凋亡等机制达到抑制H_(22)荷瘤小鼠肿瘤生长的作用。4、风味黑参的抗抑郁作用及初步机制研究。首先采用经典行为绝望模型,悬尾试验(TST)和强迫游泳试验(FST)来考察FBG抗抑郁作用,筛选出最佳剂量;接着通过受体拮抗剂或激动剂预处理来研究5-羟色胺能、去甲肾上腺素能、多巴胺能、γ-氨基丁酸GABA能和谷氨酸(GLU)能系统是否参与FBG在FST中的抗抑郁作用;最后测量小鼠脑组织海马区中的5-HT、NA、DA、GABA和GLU水平。结果表明:与模型组相比,FBG(100mg/kg)可显著缩短小鼠在TST和FST中不动时间,而对自主活动试验无影响。此外,通过给予阻断剂实验及脑组织匀浆指标的测定,发现FBG升高5-HT、NA和GABA水平,降低GLU水平,对DA水平无明显著性变化。由此得出FBG具有明显的抗抑郁作用,其机制可能通过5-羟色胺能、去甲肾上腺素能、GABA能和GLU能系统介导产生抗抑郁作用。
【图文】：

色谱图,色谱图,原人参二醇,人参皂苷

图 1.1 混标(A)、SLG (B)和 FBG (C)的色谱图Fig.1.1 Chromatograms of mixed standard solution (A), SLG (B) and FBG (C)人参皂苷 Rg1、Re、Rf、Rb1、Rg2、Rc、20(R)-Rh1、Rb2、Rb3、F1、Rd、Rk3、F2、Rh4、20(-Rg3、Rk1、Rg5、Rh2、原人参二醇。ginsenoside Rg1, Re, Rf, Rb1, Rg2, Rc, 20(R)-Rh1, Rb2, Rb3, F1, Rd, Rk3, F2, Rh4, 20(-Rg3, Rk1, Rg5, Rh2, protopanaxadiol.

色谱图,原人参二醇,色谱图,人参皂苷

图 1.1 混标(A)、SLG (B)和 FBG (C)的色谱图Fig.1.1 Chromatograms of mixed standard solution (A), SLG (B) and FBG (C)：人参皂苷 Rg1、Re、Rf、Rb1、Rg2、Rc、20(R)-Rh1、Rb2、Rb3、F1、Rd、Rk3、F2、Rh4、20(S)-Rg3、Rk1、Rg5、Rh2、原人参二醇。: ginsenoside Rg1, Re, Rf, Rb1, Rg2, Rc, 20(R)-Rh1, Rb2, Rb3, F1, Rd, Rk3, F2, Rh4, 20(S)-Rg3, Rk1, Rg5, Rh2, protopanaxadiol.
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R284

【参考文献】