从提取环节控制清开灵注射液大分子杂质的方法学研究

发布时间：2020-05-21 23:04

【摘要】：目的:探索不同提取温度对清开灵注射液中三种植物性药材的内源性杂质和活性成分的影响,以筛选出最佳提取温度。方法:(1)采用五种不同的温度提取三种植物性药材,然后按《中华人民共和国药典》制备清开灵注射液。(2)利用分子筛原理,用10K超滤管对五种不同温度的三种植物性药材中的大分子含量进行检测。(3)按照《中华人民共和国药典》的操作规范对五种不同温度提取的三种植物性药材及自制的清开灵注射液中的内毒素进行检查。(4)利用指纹图谱对比方法,比较五种不同温度提取的板蓝根和栀子最终提取液主要峰和物质峰的差别。(5)利用组织学微观图片,比较观察五种不同温度提取的板蓝根和金银花药材的组织学差异(6)对三种植物性药材的洗涤液进行检测,得到最佳洗涤时间。结果:(1)不同温度的板蓝根提取液,得到大分子最少的沸腾温度,小分子最多的80℃,考虑小分子/大分子,沸腾温度提取较好。(2)不同温度的金银花提取液,得到大分子最少的是90℃提取法,小分子最多的是80℃,考虑小分子/大分子,90℃提取较好。(3)不同温度的栀子提取液,得到大分子最少的是沸腾温度,得到小分子最多的70℃,考虑小分子/大分子,沸腾温度下提取较好。(4)不同温度的自制清开灵注射液,得到大分子最少的是90℃提取法,小分子最多的是80℃提取法,考虑小分子/大分子,90℃提取较好,其次是沸腾温度。(5)内毒素检查发现三种植物的初提取阶段脂多糖含量较高,但是经过无水乙醇沉淀后,脂多糖已被去除大部分,最终的自制清开灵注射液中,脂多糖含量已很少。(6)指纹图谱检测发现,小分子较多的提取温度,峰面积较大。(7)对三种药材进行洗涤,发现板蓝根的最佳洗涤时间为6分钟;金银花的最佳洗涤时间为15分钟;栀子的最佳洗涤时间为20分钟。结论:结合提取过程中的大小分子检测,综合来看90℃为最佳提取温度,其次是沸腾温度;而从单味药来看,板蓝根和栀子沸腾温度提取较好,而金银花则是90℃提取较好。
【图文】：

板蓝根,洗涤液,脂多糖,药材

图 1 板蓝根洗涤液脂多糖限量检查阳性结果染性杂质，用定量鲎试剂盒检查药材洗涤液的洗脱曲线。板蓝根药材在处理到第 6 分钟35 分钟左右无明显变化，，说明此刻内源性和从这个结果可以看出，板蓝根药材预处理的药材的指纹图谱检测

脂多糖,洗涤液,金银花

表 5 金银花洗涤液脂多糖限量检查阳性结果时间阳性结果时间阳性结果J0 22(+) J20 25(+)J1 22(+) J25 26(+)J2 22(+) J30 27(+)J4 22(+) J35 27(+)J6 23(+) J40 27(+)J8 23(+) J45 27(+)J10 24(+) J50 27(+)J15 25(+) J60 27(+)
【学位授予单位】：云南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R286.0

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