肝疏泄失常炎症机制探讨—丹皮酚通过TLR4-NF-κB信号通路治疗抑郁症肝气郁证研究

发布时间：2020-05-23 02:44

【摘要】：目的:研究丹皮酚对脂多糖诱导的抑郁症肝气郁证的小鼠模型和原代细胞模型中TLR4-NF-κB信号通路的作用,以验证肝疏泄失常炎症机制假说。方法:1.利用米诺环素(50mg/kg)、氟西汀(20mg/kg)、低剂量的丹皮酚(10mg/kg)、高剂量的丹皮酚(20mg/kg)预先对小鼠腹腔静脉注射给药(空白组和模型组注射0.9%生理盐水10mg/kg)七天后,通过腹腔注射脂多糖(0.5mg/kg)建立抑郁症肝气郁证模型,用强迫游泳实验和悬尾实验对模型进行评价。2.利用ELISA试剂盒检测抑郁症小鼠模型血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量;Western Blot测定小鼠海马区p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表达水平;实时定量PCR技术检测小鼠海马区p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表达水平。3.离体培养海马区原代神经元细胞,细胞成熟后,用丹皮酚低剂量(0.5μM),高剂量(5μM)米诺环素(10μM),氟西汀(5μM)提前24小时干预细胞,然后加入LPS(浓度为10μg/ml)溶液,孵育24小时建立抑郁症肝气郁证细胞模型。用MTT检测细胞活性。4.利用ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量;Western Blot检测细胞模型中p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表达水平;实时定量PCR技术检测细胞模型中p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表达水平。结果:1.抑郁症小鼠模型评价:与空白组相比,LPS模型组的不动时间明显变长,差异具有统计学意义(p0.01),米诺环素组、氟西汀组、丹皮酚低剂量组、丹皮酚高剂量组的不动时间与LPS模型组相比均显著性降低(P0.05)。2.ELISA试剂盒检测结果:与空白组相比,LPS组、米诺环素组、氟西汀组、丹皮酚低剂量组、丹皮酚高剂量组小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量明显增加(P0.01)。与LPS模型组相比,米诺环素组、氟西汀组、丹皮酚低剂量组、丹皮酚高剂量组小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低(P0.05),而IL-10含量显著性增高(p0.05)。Western Blot检测结果:与空白组相比,LPS模型组的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表达水平均显著性增大(P0.05),而与LPS模型组相比,氟西汀组、米诺环素组、丹皮酚低剂量组、丹皮酚高剂量组的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表达量均显著地减少(P0.05),而丹皮酚低剂量组较米诺环素组、氟西汀组和丹皮酚高剂量组而言,p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表达水平较高,且差异具有统计学意义(P0.05)。实时定量PCR检测结果:与空白组相比,其余六组的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表达水平均显著性增大(P0.05),而与LPS模型组相比,氟西汀组、米诺环素组、丹皮酚低剂量组、丹皮酚高剂量组的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表达量均显著地降低(P0.05),而丹皮酚低剂量组较米诺环素组、氟西汀组和丹皮酚高剂量组而言,p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表达水平较高,且差异具有统计学意义(P0.05)。3.离体海马原代神经元细胞MTT检测结果:与空白组相比,LPS模型组、米诺环素组、氟西汀组、丹皮酚低剂量组和丹皮酚高剂量组的细胞存活率均显著性降低(P0.05)。而氟西汀组、米诺环素组、丹皮酚低剂量组和丹皮酚高剂量组较LPS模型组细胞存活率显著增加(P0.05)。氟西汀组和丹皮酚高剂量组的细胞存活率又显著高于丹皮酚低剂量组的细胞存活率(P0.05)。4.ELISA试剂盒对细胞模型的检测结果:细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量与空白组相比,LPS模型组、米诺环素组、氟西汀组、丹皮酚低剂量组和丹皮酚高剂量组细胞上清液中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量均显著性上升(P0.01)。而氟西汀组、米诺环素组、丹皮酚低剂量组和丹皮酚高剂量组较LPS模型组相比,TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低,而IL-10显著性增高(P0.05)。丹皮酚低剂量组上清液中的TNF-α、IL-6含量明显高于米诺环素组、氟西汀组和丹皮酚高剂量组,而IL-10含量明显低于这三组(P0.05)。Western Blot对细胞模型的检测结果:与空白组相比,LPS模型组的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表达水平均显著性增大(P0.05),而与LPS模型组相比,氟西汀组、米诺环素组、丹皮酚低剂量组、丹皮酚高剂量组的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表达量均显著地减少(P0.05),而丹皮酚低剂量组p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表达明显高于米诺环素组、氟西汀组和丹皮酚高剂量组(P0.05)。实时定量PCR技术对细胞模型的检测结果:与空白组相比,其他五组的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表达水平均显著性增大(P0.05),而与LPS模型组相比,氟西汀组、米诺环素组、丹皮酚低剂量组、丹皮酚高剂量组p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表达量均显著地降低(P0.05),丹皮酚低剂量组较米诺环素组、氟西汀组和丹皮酚高剂量组而言,p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表达水平较高,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论:丹皮酚对抑郁症肝气郁证有积极的治疗作用,这与前人研究是吻合的,而丹皮酚对抑郁症的治疗作用可能是有剂量依赖性的。丹皮酚通过抑制TLR4和NF-κB信号通路的激活,从而抑制p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的表达,进而抑制促炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6,促进抗炎性因子IL-10的产生达到缓解抑郁样症状的疗效。
【图文】：

图 3 组 比 较 ***P<0.01， 与 LPS 模 型 组 比 较###P<0.01。 ）和 LPS 诱 导 后 ， 小 鼠 悬 浮 不 动 时 间 结 果PS 模 型 组（ LPS）的 悬 浮 不 动 时 间 明 显 变PS+M） 、 氟 西 汀 组 （ LPS+FLU） 、 丹 皮丹 皮 酚 高 剂 量 组 （ LPS+PH） 的 悬 浮 不 动 降 低 （ P<0.05） ， 丹 皮 酚 低 剂 量 组 小 鼠 环 素 组 、氟 西 汀 组 、丹 皮 酚 高 剂 量 组 小 果

图 3 组 比 较 ***P<0.01，， 与 LPS 模 型 组 比 ###P<0.01。 ） 和 LPS 诱 导 后 ， 小 鼠 悬 浮 不 动 时 间 结LPS 模 型 组（ LPS）的 悬 浮 不 动 时 间 明 显 LPS+M） 、 氟 西 汀 组 （ LPS+FLU） 、 丹 丹 皮 酚 高 剂 量 组 （ LPS+PH） 的 悬 浮 不 性 降 低 （ P<0.05） ， 丹 皮 酚 低 剂 量 组 小 诺 环 素 组 、氟 西 汀 组 、丹 皮 酚 高 剂 量 组 结 果
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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5 邱远;丁艳;徐文岳;;TLR2和TLR4的TLR/IL-1 receptor结构与功能[J];免疫学杂志;2014年02期

6 杨玉兴;魏品康;陈慧;;从痰辨识癌症并发抑郁症的理论渊源[J];中华中医药学刊;2014年01期

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9 鱼浚镛;田金洲;;抑郁症中医文献相关认识[J];山东中医药大学学报;2012年03期

10 李骅;王四旺;张邦乐;;丹皮酚的药理活性和药物动力学研究进展[J];亚太传统医药;2010年02期

本文编号：2677015