重楼皂苷化合物诱导乳腺癌细胞自噬和凋亡机制的研究

发布时间：2020-05-26 15:54

【摘要】：重楼皂苷化合物具有抗病毒、抗炎、抗肿瘤活性,然而,其抗肿瘤机制尚有待进一步揭示。本研究中,我们以乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞为模型,对重楼皂苷中提取的皂苷类化合物进行了抗乳腺癌活性筛选,并选取其中活性最好的化合物XA-2开展了体外抗肿瘤作用机制研究。首先,我们通过MTT法检测了XA-2对乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231的增殖的影响,采用Annexin-V/FITC染色并通过流式细胞术检测了XA-2对MCF-7和MDA-MB-231细胞凋亡的影响;并且我们使用自噬抑制剂3-MA和BFA预处理乳腺癌细胞后再加入XA-2作用细胞,通过MTT实验和流式凋亡实验检测两株细胞的生存率和细胞凋亡情况;通过Western-blot法检测了XA-2对凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase9和PARP的影响,并检测了对细胞凋亡和自噬具有重要调控作用的Akt/mTOR信号通路相关蛋白Akt、mTOR、P70S6k和4EBP1的活化以及自噬相关蛋白LC3和p62影响;进一步通过吖啶橙染色的方法以及透射电镜拍摄检测了XA-2对MCF-7和MDA-MB-231细胞自噬溶酶体和自噬小体的影响。研究结果显示,重楼皂苷提取物XA-2对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖具有显著的抑制效果,其IC50值分别为2.54μM和2.28μM,并且其作用具有浓度依赖性;XA-2能够诱导MCF-7和MDA-MB-231细胞的凋亡,导致浓度依赖性的促进Caspase3、9以及PARP的切割活化;XA-2诱导两株乳腺癌细胞发生自噬,促进自噬相关蛋白LC3-II/I比值显著上升以及p62下调;XA-2诱导的自噬作用细胞的凋亡具有明显的促进作用;XA-2可呈浓度依赖性地抑制细胞凋亡和自噬的关键蛋白Akt、mTOR、P70S6k和4EBP1的活化,表明Akt/mTOR信号通路可能是XA-2发挥抗乳腺癌作用的一个关键途径。
【图文】：

重楼皂苷化合物的结构式Fig.1.ChemicalstructuresofParissaponins

图 2 重楼皂苷化和物对乳腺癌细胞体外生存活率的影响Fig. 2. Effect of XA-2 on the proliferation MCF-7 and MDA-MB-231 cells使用不同浓度（0、1.56、3.125、 6.25、12.5、25、50 μM）重楼化合物处理乳腺癌细胞 48h，细胞为 4 ×104/mL，通过 MTT 实验检测 MCF-7 和 MDA-MB-231 的生存率。设置三次独立重复试验，
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

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本文编号：2682076