雷公藤甲素对慢性大脑低灌注引起的白质损伤的作用研究

发布时间：2020-05-29 17:27

【摘要】：目的由慢性大脑低灌注导致的皮层下缺血性血管性痴呆是一种常见的血管性痴呆,目前临床上尚无切实有效的治疗药物。该疾病的主要病理改变为脑白质损伤,包括少突胶质细胞丢失、髓鞘脱失等,其发生与小胶质细胞激活引起的炎症反应密切相关。已有研究发现雷公藤甲素在多种神经系统疾病中可以抑制小胶质细胞的激活,因此本课题拟研究雷公藤甲素对慢性大脑低灌注引起的白质损伤的治疗作用并初步探讨其作用机制。方法动物实验采用雄性8-10周龄C57BL/6J小鼠,分为假手术组、右侧颈总动脉结扎(right unilateral common carotid artery occlusion,rUCCAO)模型组、雷公藤甲素低剂量给药组(5μg/kg/d)、雷公藤甲素高剂量给药组(20μg/kg/d)。给药组在手术后腹腔注射雷公藤甲素21天后,各组进行新事物识别、水迷宫试验。行为学实验结束后,分别进行Western blot、免疫荧光染色、酶联免疫吸附剂测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、生化指标测定。离体细胞实验采用小胶质细胞株BV2细胞和少突胶质细胞培养,分别设正常对照组组、缺糖缺氧处理组、雷公藤甲素低剂量给药组(0.001 nM)、雷公藤甲素中剂量给药组(0.01 nM)、雷公藤甲素高剂量给药组(0.1 nM),进行免疫荧光染色、ELISA、PI/Hoechst、乳酸脱氢酶测定。结果在慢性大脑低灌注后,雷公藤甲素高剂量给药组较模型组在新事物识别试验中的识别分数有显著提高(P0.001),在水迷宫试验的学习阶段,雷公藤甲素高剂量给药组在寻找平台潜伏期上有明显缩短(P0.05),而在记忆保持的测试阶段中,目标象限的探索时间明显延长(P0.001),而雷公藤甲素低剂量给药组则无显著性差异(P0.05)。髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)反应髓鞘损伤情况,雷公藤甲素高剂量给药组小鼠较模型组小鼠在MBP的免疫荧光强度和Western blot的表达水平上都有明显上调(P0.01,P0.001),并且CC-1+少突胶质细胞数量明显增多(P0.001)。此外,高剂量雷公藤甲素明显抑制了小胶质细胞激活(P0.001)以及炎症因子TNF-α、IL-6的表达(P0.05,P0.05)。雷公藤甲素低剂量给药组在以上指标上有改善趋势,但无显著性差异(P0.05)。假手术组、模型组、雷公藤甲素高剂量给药组小鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白、肌酐、血尿素氮等反应肝肾功能的生化指标水平均无显著差异(P0.05)。在离体实验中,通过MBP免疫荧光染色、PI/Hoechst、乳酸脱氢酶检测发现缺糖缺氧后雷公藤甲素剂量依赖地减轻少突胶质细胞损伤,同时通过ELISA检测发现雷公藤甲素还显著抑制了小胶质细胞株BV2细胞TNF-α、IL-6的表达。结论雷公藤甲素可以改善慢性大脑低灌注引起的认知功能障碍和脑白质损伤,该作用可能是通过抑制小胶质细胞激活和TNF-α、IL-6表达,减少少突胶质细胞的丢失,从而改善脱髓鞘的情况,提示雷公藤甲素对慢性大脑低灌注引起的皮层下缺血性血管性痴呆有潜在的治疗作用。
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】