人参皂苷Rg1促进内皮修复抑制血管再狭窄的作用及机制研究

发布时间：2020-05-30 12:48

【摘要】：目的:探究人参皂苷Rg1促进内皮修复及抑制血管再狭窄作用,并探讨微环境和钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)在其中的作用。方法:采用大鼠颈总动脉球囊损伤模拟血管再狭窄模型。(1)将60只大鼠随机分为:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、Rg1 4 mg/kg组、Rg1 8 mg/kg组和Rg116 mg/kg组,粒细胞集落刺激因子(granulocyte-colony stimulating factor,G-CSF 30μg/kg)组为阳性对照。造模后,G-CSF组连续给药7天,人参皂苷Rg1低、中、高剂量连续给药14天,造模给药后14天取材,通过组织学检测评价Rg1抑制血管狭窄作用。流式细胞技术检测外周血中CD133~+与VEGFR-2~+标记的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)。免疫荧光双标法检测血管处CD133与α-平滑肌激动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)标记的平滑肌祖细胞(smooth muscle progenitor cells,SMPCs)。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中基质细胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、soluble fractalkine(sFKN)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量变化。免疫组化检测血管SDF-1α、SCF、fractalkine(FKN)、CXCR4、c-kit、CX3CR1和CD31的蛋白表达。(2)将40只大鼠随机分为:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、Rg1 16 mg/kg组和Rg1 16 mg/kg+CaSR抑制剂(NPS 2143,4.5 mg/kg)组。造模后,Rg1 16 mg/kg+CaSR抑制剂组每两天给一次CaSR抑制剂NPS 2143,给药14天后取材,通过组织学检测评价Rg1抑制血管狭窄作用。流式细胞技术检测外周血中CD133~+与VEGFR-2~+标记的EPCs。免疫组化检测血管CD31、CaSR、JNK和P38的蛋白表达。免疫荧光双标法检测血管处CD133与α-SMA标记的SMPCs。结果:(1)人参皂苷Rg1和G-CSF降低球囊损伤导致的新生内膜面积(NIA),新生内膜面积/中膜面积(NIA/MA)的比值,减轻内膜增生;并且降低新生内膜面积/内弹力板围绕面积(NIA/IELA)的比值,增加管腔面积(LA),减轻管腔狭窄。(2)人参皂苷Rg1能增加外周血中CD133~+与VEGFR-2~+标记的EPCs,同时与G-CSF均可增加血管壁CD31的蛋白表达。(3)人参皂苷Rg1与G-CSF减少血管损伤部位CD133与α-SMA标记SMPCs的表达。(4)人参皂苷Rg1与G-CSF能减少血清中的SDF-1α、SCF和sFKN的含量,同时减少血管损伤部位SDF-1α/CXCR4轴、SCF/c-kit轴和FKN/CX3CR1轴蛋白的表达。(5)CaSR抑制剂降低人参皂苷Rg1的抑制血管狭窄作用,降低Rg1对外周血中CD133~+与VEGFR-2~+标记的EPCs及血管壁的CD31的阳性表达的影响。(6)人参皂苷Rg1降低血管损伤部位的CaSR及其下游JNK和P38的蛋白表达。(7)人参皂苷Rg1降低血管损伤部位内膜增生处CD133与α-SMA双阳性细胞的表达,但在内皮层CaSR表达增加。结论:(1)人参皂苷Rg1具有促进内皮修复及抑制血管再狭窄作用;(2)人参皂苷Rg1作用机制与其动员EPCs促进血管再内皮化有关;(3)人参皂苷Rg1通过改变微环境中的SDF-1α/CXCR4轴、SCF/c-kit轴和FKN/CX3CR1轴蛋白表达,抑制SMPCs的增殖;(4)人参皂苷Rg1可能通过调控CaSR的区域表达而动员EPCs促进血管再内皮化,抑制内膜增生和血管再狭窄。
【图文】：

16。图中左侧血管为大鼠的右侧颈总动脉，右侧y using Evans staining. In the figure, the left ve right vessel was the left common carotid arterySham 组血管形态完整，无内膜增生形成约为 20%，，NIA 增加 11 倍，LA 降加 10 倍和 11 倍（P<0.05），血管内膜增g/kg组NIA 降低 30%，LA增加1.5倍，5%（P<0.05）；Rg1 16 mg/kg 组 NIA 降

遵义医科大学硕士学位论文 胡安玲倍，NIA/MA 和 NIA/IELA 分别降低 50%和 50%（P<0.05）；G-CSF 组 NIA 降低 60%，LA 增加 2.3 倍，NIA/MA 和 NIA/IELA 分别降低 65%和 64%（P<0.05），Rg18mg/kg组、Rg1 16 mg/kg 组和 G-CSF 组抑制血管内膜增生，减少血管管腔狭窄。
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2688153