大黄蛰虫丸抗肝癌活性成分筛选及其药动学研究

发布时间：2020-06-01 22:57

【摘要】：中医药在治疗肿瘤方面有着其独特的优势。大黄蛰虫丸是治疗肿瘤的经典名方。但是由于中药复方的复杂性,大黄蛰虫丸方中的药效物质尚不明确,这直接影响了其作用机制的深入研究,毫无疑问,明确大黄蛰虫丸的抗肿瘤药效物质是进一步开展药理机制研究的前提。本论文主要从未知成分鉴别确定、细胞活性筛选、主要成分体内药动学研究三个层次全面考察了大黄蛰虫丸抗肿瘤药效物质基础,以期进一步阐释大黄蛰虫丸干预肿瘤的药效物质的科学内涵。采用HPLC方法进行大黄蛰虫丸指纹图谱的研究,建立大黄蛰虫丸指纹图谱,对市售大黄蛰虫丸进行了初步的质量标准控制。在客观表征大黄蛰虫丸整体化学信息的基础上,通过相似度分析、主成分分析和聚类分析,以及变异数和共有峰的峰占比统计,并利用化学对照品,对其特征性成分进行定性分析。同时为了验证这些成分以及更全面获得大黄蛰虫丸方中主要成分,利用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术及Peakview分析软件鉴别出大黄蛰虫丸方中137种化学成分,筛选获得含量较高的成分,并对这次些成分进行了药味归属,其中大黄中15种,地黄20种,黄芩11种,桃仁和苦杏仁13种,白芍16种,甘草4种,动物药58种。结合HPLC指纹图谱结果,通过HPLC-UV液相色谱技术,对其中20种特征性成分(次黄嘌呤(Hypoxanthine)、尿囊素(Allantoin)、没食子酸(Gallic acid)、苦杏仁苷(Amygdalin)、龙胆酸(2,5-dihydroxybenzoic acid)、芍药苷(Paeoniflorin)、毛蕊花糖苷(Verbascoside)、对甲氧基苯乙酸(4-Hydroxyphenylacetic acid)、甘草素(Liquiritigenin)、黄芩苷(Baicalin)、柚皮素(Naringenin)、丹皮酚(Paeonol)、黄芩素(Baicalein)、汉黄芩素(Wogonin)、芦荟大黄素(Aloeemodin)、甘草酸(glycyrrhizic acid)、大黄酸(Rhein)、大黄素(Emodin)、大黄酚(Chrysophanol)、大黄素甲醚(Physcion))进行了含量测定,结果显示白芍中的没食子酸含量最高(2445.10±755.97)μg/g,其次是黄芩苷(2252.9±547.0)μg/g、苦杏仁苷(2164.10±694.51)μg/g 及毛蕊花糖苷(1795.83±604.25)μg/g等成分。君药大黄中各蒽醌类成分含量略有差异,以大黄酚水平最高,其次大黄素、大黄酸,芦荟大黄素及大黄素甲醚含量较低;动物药中次黄嘌呤含量较高;含量较低的为黄芩素、龙胆酸等成分,低于150pg/g。由于药物发挥有效作用的是入血成分,我们对大黄蛰虫丸入血成分进行了研究,结果显示,并不是所有药材成分都能入血,在入血成分的半定量分析中,我们发现在原方中含量一般的成分在入血成分中含量占比变高,这可能与物质的转换或者代谢有关。在此基础上,通过体外细胞实验研究大黄蛰虫丸中主要成分干预耐药肝癌细胞SMMC-7721/DOX活力的影响,以期能够尽可能多的获得大黄蛰虫丸治疗肝癌相关的物质基础,实验发现次黄嘌呤、大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、汉黄芩素等5种成分对耐药肝癌细胞活力抑制作用强,可能是大黄蛰虫丸发挥直接的抑制SMMC-7721/DOX活力的主要药效物质。最后,我们尽可能多的选取这些入血有效成分,研究大黄蛰虫丸的大鼠体内药物动力学行为。结果显示有效成分的体内生物利用度均有不同程度的增加。综上,本文通过三个不同层次客观表征了大黄蛰虫丸抗肿瘤有效成分化学信息,结合细胞实验和药物动力学研究,获得大黄蛰虫丸干预耐药肝癌细胞的药效物质及其体内吸收代谢规律,以期为探讨大黄蛰虫丸抗肿瘤物质基础提供参考。
【图文】：

黄等素（Ｂａｉｃａｌｅｉｎ）、汉黄岑素（Ｗｏｇｏｎｉｎ）、芦荟大黄素（Ａｌｏｅｅｍｏｄｉｎ）、甘草酸（ｇｉｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ逡逑ａｃｉｄ）、大黄酸（Ｒｈｅｉｎ）、大黄素（Ｅｍｏｄｉｎ）、大黄酚■邋（Ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ）、大黄素甲醚（Ｐｈｙｓｃｉｏｎ）逡逑等，其结构式见图１－２。逡逑５逡逑

图１－３技术路线图逡逑参考文献逡逑［１］国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［Ｓ］．北京：中国医药科技出版社，，２０１５．逡逑
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284;R285.5

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本文编号：2692194