黄酮类化合物对bFGF活性影响的初步研究

发布时间：2020-06-09 10:05

【摘要】：肿瘤细胞在生长和转移过程中会通过分泌各种血管生成因子促进血管生成,进而促进肿瘤转移。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是一种有效的促血管生成因子。目前,针对bFGF为靶点进行肿瘤药物的开发已经成为一个热点。三叶青是我国独有而珍贵的一种中药材,大量研究表明三叶青具有抗肿瘤活性。因此,以bFGF作为靶向分子筛选三叶青中能与bFGF相互作用的亲和因子,以及亲和因子对bFGF活性的影响是本文论文研究的重点。本试验利用bFGF亲和层析柱筛选三叶青中与bFGF特异性结合的有效成分,并进行鉴定。运用亲和层析法、紫外-可见分光光度法、圆二色谱法和非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳(Native-PAGE)测定三叶青中bFGF亲和因子与bFGF及其修饰体FGFC的亲和性;同时以小鼠胚胎成纤维细胞Balb/c 3T3和神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y构建模型,采用MTT法和以神经突触生长为评价指标,检测亲和因子对FGFC生物活性的影响;为了提高鉴定得到的三叶青bFGF亲和因子儿茶素的生物利用率及药效,采用酰基化修饰法探讨儿茶素衍生物的合成。结果如下:1.三叶青中bFGF亲和因子筛选结果显示,三叶青中与bFGF特异性结合的有效成分为儿茶素和原花青素B1。2.亲和层析试验结果显示,儿茶素及原花青素B1与FGFC结合,且PBS和甘氨酸中未观察到洗脱物质。紫外-可见分光光度法结果显示,儿茶素与蛋白孵育后,蛋白在204 nm处的肽键吸收峰红移,原花青素B1与蛋白孵育后,蛋白在204 nm处的肽键吸收峰变强,并且红移。圆二色谱法显示,两种物质均加强蛋白CD光谱正峰和负峰的强度。非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳结果显示,儿茶素及原花青素B1抑制FGFC的迁移,且具有剂量依赖性。以上结果均显示,儿茶素及原花青素B1可以与FGFC亲和,并且改变了蛋白质的构象。3.Balb/c 3T3细胞模型试验结果显示,1 mg/mL儿茶素对Balb/c 3T3细胞增殖有显著的抑制作用。500μg/mL和1 mg/mL儿茶素、原花青素B1均对25 ng/mL FGFC促细胞增殖活性有显著的抑制作用。当浓度为1 mg/mL时,儿茶素对FGFC的抑制作用最强;当浓度为500μg/mL时,原花青素B1的活性最强。4.SH-SY5Y细胞模型试验结果显示,儿茶素及原花青素B1浓度在50μg/mL以上有细胞毒性,浓度从1μg/mL到50μg/mL均显著抑制FGFC的活性,且具有剂量依赖性。5.儿茶素衍生物合成试验显示,初步合成儿茶素衍生物,证明了酰基化修饰法的可行性。
【图文】：

晶体结构

黄酮类化合物对 bFGF 活性影响的初步研究起始密码子从一个共同的 mRNA 翻译而来[10]。低分UG 起始密码子翻译的 18 kDa 蛋白质，存在于细胞质，通过与成纤维生长因子受体（fibroblast growth fa激活下游信号通路；高分子量（HMW）bFGF 异构过在 CUG 位点上游翻译起始和在 AUG 密码子框内产于 FGFRs[9]。bFGF 由多种细胞类型产生，包括基质等[7,11-12]。大量研究表明 bFGF 是一种多功能生长因胞和骨髓基质细胞等多种细胞的增殖和分化，并能诱进轴突生长的有效生长因子，通过影响神经细胞、雪进近端神经根的轴突生长，，在周围神经缺损的再生中

信号传递模型

图 1.2 bFGF/FGFR 信号传递模型Figure 1.2 Model for bFGF/FGFR signalingGF/FGFR 偶联信号转导途径的激活在血管生成过程中发挥着重要作用。其信号级联与细胞生长和分化有关，PI3K/Akt 信号级联涉及细胞存活和细而 PI3K 和 PKC 信号级联在细胞极性的控制中起作用[7]。在内皮细胞中， ERK1/2 和 PKC 信号通路，以及 Ras-MAPK、PI3K-Akt 信号转导途径增殖、迁移、蛋白酶产生和血管生成[9]。bFGF 在肿瘤中的作用机制 bFGF/FGFR 信号转导失调越多的证据表明，bFGF/FGFR 信号转导涉及多种生物学功能，如胚胎发生、创伤修复和正常造血，但同时在肿瘤生长过程中也起着重要的作用 FGFR 在正常细胞中的表达受到高度调控，并且 bFGF 信号转导的终止实现。然而，肿瘤细胞中的 bFGF/FGFR 信号传导紊乱，这可能与多种机制有关[20]。癌细胞的耐药性被认为是药物失效和疾病恶化的主要原因
【学位授予单位】：浙江农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285

【参考文献】