金线莲多糖提取物对NAFLD调脂保肝作用及机制研究

发布时间：2020-06-12 06:33

【摘要】：目的:通过观察金线莲多糖提取物(Anoectochilus roxburghii polysaccharides,ARP)对LO2细胞脂肪变性模型和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)动物模型的影响,探讨ARP对NAFLD的调脂保肝作用及其可能的作用机制,以期为该药的进一步开发研究和临床应用提供科学依据。方法:用含50%胎牛血清的DMEM培养液诱导人肝LO2细胞,以建立肝细胞脂肪变性模型,油红O染色,倒置显微镜观察肝细胞中脂滴积聚情况并检测细胞内甘油三酯(TG)水平。检测ARP对LO2细胞的细胞毒作用,然后设正常组,模型组,ARP高、中、低剂组。药物作用24 h后,检测肝细胞内TG,细胞培养上清液肝酶(ALT、AST)及细胞氧化应激相关指标,包括超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)。取48只雌性SPF级(Sprague-Dawlay,SD)大鼠,按体质量随机分为正常组,模型组,辛伐他汀组(8 mg/kg),ARP高、中、低剂量组(238、119、59.5 mg/kg)。早上正常组给予普通饲料喂养及等体积生理盐水灌胃,其余各组均以1 m L/100 g灌服高脂乳剂复制大鼠NAFLD模型,下午正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,药物组分别给予辛伐他汀及ARP高、中、低剂量灌胃,连续给药8周。实验期间每天记录大鼠的生长状况,每周定期称重。实验结束末,取血并及时摘除肝脏称取肝湿重。肉眼观察各组大鼠肝脏形态变化,光镜下观察病理形态变化并评分;测定各组血脂,血糖,肝功能,肝脂,超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)的含量;逆转录-聚合酶链反应法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测CYP2E1基因的表达。结果:第一部分ARP对肝细胞脂肪变性模型的研究50%胎牛血清诱导LO2细胞24 h后,油红O染色可见细胞内有大小不等的橘红色脂滴存在,与正常组比较,模型组细胞内TG含量显著增加(P0.01),表明NAFLD脂肪变性体外模型成功复制。ARP可改善脂肪变性LO2细胞内的脂质沉积、显著降低细胞内TG含量(P0.01),显著降低细胞上清液ALT、AST含量(P0.01),显著升高细胞内SOD、GSH-Px(P0.01)活性。第二部分ARP对NAFLD大鼠实验研究与正常组比较,模型组血清TG、TC、LDL-C、FFA、FBG、ALT、AST水平显著升高(P0.05或0.01),血清HDL-C明显降低(P0.05),肝指数及肝TC、TG、MDA含量均显著升高(P0.01),肝SOD活性明显下降(P0.01),NAFLD活动度积分(NAS)明显升高(P0.01),肝CYP2E1表达量明显增加(P0.01),肝脏病理切片显示模型组肝小叶界限模糊,肝索排列紊乱,肝细胞明显增大、呈肿胀态,并可见大泡样脂肪变性。与模型组比较,ARP可显著降低血清TG、TC、LDL-C、FFA水平(P0.05或0.01),明显升高HDL-C水平(P0.05),显著降低血清ALT、AST含量(P0.01),明显降低肝脂质TC、TG水平(P0.05或0.01),显著升高SOD活性(P0.01),显著降低MDA水平(P0.05或0.01),明显降低NAFLD活动度积分(P0.05),改善NAFLD大鼠脂肪变性程度,明显下调CYP2E1基因表达(P0.05)。结论:1.50%胎牛血清和8周高脂乳剂灌胃分别能成功诱发符合人类NAFLD病程的肝细胞LO2脂肪变性模型和非酒精性脂肪肝病大鼠模型。2.ARP能降低脂肪变性LO2细胞内的TG含量及NAFLD大鼠血清TG、TC、LDL-C,增加HDL-C,减少血清FFA含量,缓解血脂代谢紊乱,降低肝脏脂质TC、TG水平,降低NAS,改善肝脏脂质代谢及肝脂肪变。3.ARP能降低脂肪变性LO2细胞肝酶活性及NAFLD大鼠模型的血清肝酶活性,修复NAFLD病程内由脂质积聚而导致的肝损伤。4.ARP能下调NAFLD大鼠肝组织CYP2E1 m RNA表达,并能改善体内、体外氧化应激及脂质过氧化程度,其机制可能是通过减少肝细胞FFA的摄入,降低了肝内TG的合成,减轻了过量FFA的毒性作用及肝脏脂肪蓄积,从而改善线粒体β氧化,有效的清除ROS及自由基,保护肝线粒体,改善肝功能及肝脏脂肪变性,使肝细胞免受脂质过氧化及氧化应激的损伤,有效逆转NAFLD。
【图文】：

肉眼观察,水样变性,肝细胞,肝索

ARP 低剂组 ARP 中剂组 ARP 高剂组图 3-4 肉眼观察大鼠肝脏组织病变的情况Fig. 3-4 Observation of hepatic tissue pathology in rats3.3.5 光镜下肝组织病理切片观察正常组肝小叶结构完整，轮廓清晰可见，肝窦正常，肝索以中央静脉为中心呈放射状整齐排列，肝细胞胞质均匀，呈多边形，无变性；模型组肝小叶结构不清，可见淋巴细胞和浆细胞的炎性浸润，细胞核偏移，，肝窦数量减少，肝索排列紊乱，肝组织具有明显水样变性和脂肪变性，肝细胞内有明显大小不等的脂滴空泡；辛伐他汀组及ARP各剂量组较模型组脂肪变性程度明显减轻，炎症反应减轻，脂肪空泡也都有所减少，部分细胞呈水样变性，大部分肝细胞接近正常形态。

光镜,大鼠,辛伐他汀,组图

辛伐他汀组 ARP 低剂组ARP 中剂组 ARP 高剂组图3-5 光镜下观察大鼠的肝组织病理病变（HE×100）Fig. 3-5 The fractographic of hepatic tissue pathology in rats
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】