落新妇苷对MPTP诱导帕金森病小鼠的神经保护作用

发布时间：2020-06-12 23:39

【摘要】：帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,主要表现为运动的普遍减慢(运动迟缓)以及静止性震颤或僵硬等其他症状。另外还有一些的非运动症状包括嗅觉丧失,睡眠障碍,情绪障碍,过度流涎以及便秘等。在过去的一个多世纪里,对PD发病机制的研究已经取得了一定的进步,主要有以下几个方面比如炎症、路易小体沉积等。目前针对PD的治疗只能暂时缓解症状,并不能延缓疾病进展。国内外也已经开展了多种中药单体的抗PD活性评价,但对具有神经保护的单体的探索仍处在基础阶段,仍然存在大量具有潜在作用的单体有待发掘。落新妇苷(Astibin,AST)属于二氢黄酮醇苷类化合物,其主要来源是虎耳草科落新妇属种的根茎,百合科菝葜属菝葜的根茎以及胡桃科黄杞属黄杞叶。已有研究表明落新妇苷可以抑制巨噬细胞中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的产生,并且还有研究表明落新妇苷通过抑制Jak3/Stat3信号通路进而改善咪喹莫特诱导的牛皮癣样皮肤损伤以及通过激活CREB/BDNF信号通路改善阿尔茨海默病小鼠模型中的学习和记忆缺陷。本课题研究了落新妇苷对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病小鼠运动能力、多巴胺能神经元数量、酪氨酸羟化酶的表达以及潜在信号通路的影响。首先,我们在落新妇苷给药结束后采用爬杆实验和悬挂实验对帕金森病模型小鼠的运动能力进行评估;采用高效液相色谱法(HPLC)衡量纹状体内多巴胺、血清素及其代谢物含量的变化;同时采用蛋白印迹法(WB)检测纹状体内酪氨酸羟化酶(TH),α-突触核蛋白以及潜在通路PI3K-Akt相关分子的表达变化;并结合免疫荧光共标法(IF)检测中脑黑质致密部多巴胺能神经元的数量和胶质细胞(小胶质细胞和星形胶质细胞)的激活情况。行为学实验结果表明落新妇苷提高了MPTP诱导的帕金森病小鼠的运动能力。HPLC结果表明落新妇苷可减少MPTP诱导的纹状体多巴胺、二羟苯乙酸、高香草酸、血清素和5-羟吲哚乙酸含量的降低。IF结果表明落新妇苷可减少黑质纹状体多巴胺能神经元的丢失,并减少黑质区胶质细胞的过度激活。WB结果表明落新妇苷在MPTP处理后抑制α-突触核蛋白过度表达并激活纹状体中的PI3K-Akt通路。落新妇苷还阻止了MPTP诱导的纹状体总超氧化物歧化酶和谷胱甘肽活性的降低。这些结果表明落新妇苷通过激活PI3K-Akt信号通路抑制神经胶质增生,α-突触核蛋白过度表达和与帕金森综合征相关的氧化应激,进而改善多巴胺能神经元的微环境,减少其死亡。这些实验结果提示落新妇苷对帕金森病小鼠具有神经保护作用。
【图文】：

神经保护作用,信号通路,根茎,菝葜属

1.3 落新妇苷的研究依据落新妇苷（Astilbin, AST）属于二氢黄酮醇苷类化合物，分子量是 450.408，其化学结构式如图1-1。其主要植物来源包括虎耳草科落新妇属植物的根茎，百合科菝葜属植物光叶菝葜的根茎以及胡桃科黄杞属植物黄杞叶。这些年来，研究人员对中药单体——落新妇苷展开了深入的研究，发现其具有缺血再灌注损伤保护，镇痛、抗菌，，降糖降脂，抗氧化等药理活性 [55, 56]。体外研究表明落新妇苷显着抑制巨噬细胞中一氧化氮（NO）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的产生 [57]。另外体内实验表明落新妇苷通过抑制 Jak3/Stat3 信号通路进而改善咪喹莫特诱导的牛皮癣样皮肤损伤 [58]。还有研究表明落新妇苷通过激活 CREB/BDNF 信号通路改善阿尔茨海默病小鼠模型中的学习和记忆缺陷 [59]。以上关于落新妇苷的研究提示了其可能具有神经保护作用。图 1-1 落新妇苷（Astilbin，AST）的结构Fig.1-1 Chemical structure of Astilbin (AST)通过文献调研，并未发现关于落新妇苷和 PD 的报道。本课题通过一系列的实验验证落新妇苷对 PD 小鼠的神经保护作用。我们通过行为学衡量 PD 小鼠的运动功能，通过免疫荧光共标实验检测中脑黑质多巴胺能神经元的数量以及胶质细胞的激活状况，通过高效液相色谱法（HPLC）衡量纹状体内多巴胺

给药时间,动物实验,腹腔注射,给药

（3）实验的分组以及给药的方案：将小鼠随机分为三组，每组15只，每天早上八点半称量小鼠的体重，九点之后进行腹腔注射。实验给药的方案如下（图2-1）：（A）空白对照组（NS）：连续12天腹腔注射生理盐水，其注射体积为 0.1ml/10g体重。2.1.4
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】