红花蜂花粉多糖组分Ⅰ对H22-荷瘤小鼠的抑瘤作用与机制研究

发布时间：2020-06-14 22:58

【摘要】：目的:研究红花蜂花粉多糖组分Ⅰ(PBPC I)的体内抑瘤作用与作用机制。方法:以红花蜂花粉为原料,利用水提醇沉法提取总多糖,脱蛋白后,通过DEAE—52纤维素柱层析分离,Saphadex-G75柱层析纯化,得到PBPCⅠ。将60只BALB/c雌性小鼠随机分为6组,正常对照组、肿瘤模型组、环磷酰胺(CTX)组以及PBPCⅠ低、中、高剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均在小鼠的右前肢腋窝皮下各注射细胞密度为1 × 10~7个/ml的0.2ml H22肝癌细胞,建立H22肝癌肿瘤模型。PBPCⅠ低、中、高剂量组每天分别灌胃给予 PBPCⅠ 100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg,CTX 组每天皮下注射 CTX 30mg/kg。正常对照组与肿瘤模型组每天灌胃给予等容积的生理盐水,连续15天。末次给药后,各组小鼠禁食不禁水12h,摘眼取血,分离血清,酶联免疫吸附试验(ELISA)法钡测血清中 IL-1α、IL-6、IFN-γ、TNF-κ、IL-2、VEGF含量。小鼠称体质量后,脱颈处死,剥离瘤块,取脾脏及胸腺,分别称质量,计算抑瘤率与免疫器官指数。HE染色法分别观察各组的细胞形态变化。通过实时定量PCR(RT-qPCR)实验观察bax、p53、c-myc、bcl-2基因的相对表达量;蛋白质印迹(Westemblot)实验测定Bax、P53、C-myc、Bcl-2的蛋白表达量。结果:与肿瘤模型组相比,CTX组和PBPC I低、中、高剂量组对小鼠H22肝癌的抑瘤率分别为67.93%、33.48%、45.69%、57.86%,差异显著。同时PBPCⅠ低、中、高剂量组还能显著提高荷瘤小鼠体质量、免疫器官指数,并明显升高荷瘤小鼠血清中IFN-γ、IL-2、TNF-a水平,降低血清IL-1a、IL-6、VEGF水平。HE染色结果示,随着PBPC I剂量的升高,肿瘤组织疏松,细胞减少,核浓缩、核碎裂、核分裂的一些凋亡特征。RT-qPCR实验表明PBPC I各剂量组均能下调c-myc、bcl-2基因转录,并上调bax、p53基因转录。同时Western blot实验进一步证实,PBPC I低、中、高各剂量组均可使肿瘤组织的Bcl-2、C-myc蛋白表达量降低,使Bax、P53蛋白的表达量升高。结论:PBPCⅠ对H22荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用,其作用机制可能通过保护免疫器官、调控免疫因子与VEGF水平,调节Bcl-2、C-myc、Bax、P53表达水平而促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤的分裂增殖与生长。
【学位授予单位】：大理大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

荷瘤小鼠

PBPCⅠ对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

荷瘤小鼠,HE染色

图 2.2 各组 H22 荷瘤小鼠组织 HE 染色的结果：Low，100mg/kg、Middle，200mg/kg、 High，400mg/kg 、Control 与 Model，0.1ml/10g NaCl、 CTX30mg/kg

【参考文献】