忧遁草微繁技术及部分活性物质的分离鉴定

发布时间：2020-06-15 00:03

【摘要】：忧遁草作为我国一种重要的中草药,在抗炎、抗氧化、抗病毒、抑菌、抗肿瘤等方面具有很好的功效。通过植物组织培养的方式,优化忧遁草培养条件,使其快速繁殖,是忧遁草可持续发展的有效途径之一。本研究的目的是实现忧遁草的微繁并对其部分活性物质进行分离鉴定。主要内容包括:(1)通过改变固体培养条件下的激素配比、培养基类型、蔗糖浓度、NO_3~-/NH_4~+、磷源浓度,观察忧遁草组培苗的生长情况并测量茎高及腋芽的诱导率,确定最适合忧遁草组培苗生长的培养条件。(2)利用忧遁草带腋芽的茎段进行丛生芽及根的诱导,探究不同的培养基类型、激素种类及浓度配比对丛生芽和根的诱导的影响,确定最佳的丛生芽和根诱导培养条件。(3)通过改变液体培养条件,实现忧遁草组培苗的微观无土快繁,建立合适的液体培养体系。(4)对忧遁草实生苗与组培苗进行活性物质总黄酮的提取纯化,并进行抑菌性和抗氧化性试验,比较两者之间总黄酮含量及抑菌能力和抗氧化能力的差异性。主要研究结果如下:1.忧遁草生长及腋芽诱导最优培养条件为:改良的MS培养基(40 mmol·L~(-1)KNO_3+10 mmol·L~(-1) NH_4NO_3+3 mmol·L~(-1) KH_2PO_4,其他条件不变)+蔗糖30 g·L~(-1)+琼脂粉6 g·L~(-1)+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.8 mg·L~(-1),pH 6.0,忧遁草生长最快,腋芽诱导率最大。2.忧遁草丛生芽诱导最优培养条件为:MS+蔗糖30 g·L~(-1)+琼脂粉6 g·L~(-1)+6-BA0.8 mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1)+KT 0.2 mg·L~(-1),pH 6.0,忧遁草丛生芽诱导数最多。3.忧遁草根诱导最优培养条件为:1/2 MS+蔗糖30 g·L~(-1)+琼脂粉6 g·L~(-1)+IBA 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1),pH 6.0,忧遁草生根数较多,根系发达。4.忧遁草液体微繁最优培养条件为:改良的1/2 MS培养基(20 mmol·L~(-1) KNO_3+5mmol·L~(-1) NH_4NO_3+1.5 mmol·L~(-1) KH_2PO_4,其他条件不变)+蔗糖20 g·L~(-1)+琼脂粉6g·L~(-1)+IBA 1.0 mg·L~(-1)+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.8 mg·L~(-1)+KT 0.2 mg·L~(-1),pH 6.0。忧遁草叶片葱绿,根系发达,生长旺盛。5.用75%乙醇对忧遁草总黄酮进行粗提,测得忧遁草实生苗总黄酮含量为13.08±0.15 mg·g~(-1)。忧遁草组培苗中的总黄酮的含量是实生苗中总黄酮的含量的1.3倍,为17.22±0.31 mg·g~(-1)。经AB-8型大孔树脂纯化,忧遁草实生苗总黄酮I的含量达到60.56%±0.70%。忧遁草组培苗总黄酮II的含量达到65.62%±0.53%。经抑菌性和抗氧化性试验,总黄酮I和总黄酮II对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用,并对DPPH自由基、羟基自由基都有良好的清除能力。忧遁草组培苗提取的总黄酮II在各方面的性质都要好于忧遁草实生苗提取的总黄酮I。因此,通过组织培养的方式培育忧遁草,不仅对忧遁草的产业化种植提供种苗基础,其在药理方面的研究也有进一步的开发价值。
【学位授予单位】：大连工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S567;R284
【图文】：

第一章 绪论第一章 绪论hus nutans），又称鳄嘴花、柔刺草、沙植物[1]，是一种灌木状的草本植物，茎呈形或卵状形，顶端渐尖，基部稍偏斜，两面更长，成熟期大概为 3-9 个月（如图 1.1

第二章 材料和方法选用产地马来西亚的忧遁草实生苗茎段为外植体（图 2.1），去除叶片，经 75%乙醇简易消毒，用剪刀剪成 5-6 cm 的小段，每段均有多个节点。采用 L9（33）正交表设计正交试验，选用自来水、10%次氯酸钠、0.1%氯化汞三个因素（表 2.5）。消毒过程：自来水冲洗→75%乙醇浸泡 30 s→无菌水冲洗 2 次→10%次氯酸钠浸泡→无菌水冲洗 2次→0.1%氯化汞（添加 3-5 滴吐温 20）浸泡→无菌水清洗 4 次，用无菌滤纸吸干后放于接种盘中。将茎段两端部分剪去并剪成 2-3 cm 的茎段，每段需有一个节点，用镊子将茎段接种于培养基中，每瓶培养基接种 3 个茎段，每个试验处理接种 10 瓶，重复 3 次。将接种后的培养基放于温度 25 ℃、光照强度 1500 lx、光照时间 12 h/d 的培养室中培养30 d，每 5 d 观察培养基染菌情况并统计，最后利用统计学分析，确定忧遁草外植体最佳消毒灭菌方案。

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：2713568