姜黄素联合生态动力素对CC14诱导的肝损伤的保护作用及机制

发布时间：2020-06-17 02:34

【摘要】：目的:中药在抗肝损伤动物模型的作用已得到广泛学者的认可,但单一药物起效慢,真正在临床上得到充分应用的很少。目前国内外对中药抗肝损伤的研究,特别是对多种药物混合后的相互作用与作用机理的研究尚缺乏,直接局限了中药在临床疾病治疗的应用。本研究意在探究姜黄素、生态动力素(多种微量元素)抗急、慢性肝损伤的作用,且两者联合用药后有无协同抗肝损伤的作用,并进一步探讨其抗肝纤维化的机制。方法:第一部分:研究姜黄素和生态动力素的抗急性肝损伤作用提前1周给予BALB/c小鼠姜黄素、3个不同剂量的生态动力素混悬液灌胃干预,末次灌胃给药后给予腹腔注射0.2%CC14油剂建立急性肝损伤模型。分别检测各组小鼠的血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平;进行小鼠肝组织HE染色,初步评价姜黄素和生态动力素的抗急性肝损伤作用。第二部分:探讨姜黄素联合生态动力素通过调节Nrf2氧化应激通路抗肝纤维化的作用及机制BALB/c小鼠被反复腹腔注射20%CC14油剂,每周2次,连续6周。建立肝纤维化模型的同时给予姜黄素、生态动力素及联合药物的混悬液灌胃给药。检测各组小鼠血清ALT、AST和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(G SH-PX)、丙二醛(MDA)水平;行小鼠肝组织HE染色、天狼猩红染色,评价姜黄素、生态动力素及联合给药的抗肝纤维化效果。Real Time PCR检测小鼠肝组织内Nrf2、GSH-PX的mRNA表达,探讨姜黄素联合生态动力素通过调节Nrf2氧化应激通路抗肝纤维化的机制。结果:第一部分:研究姜黄素和生态动力素的抗急性肝损伤作用0.2%CC14油剂单次腹腔注射可造成小鼠明显的急性肝损伤模型,表现为CC14注射24h后小鼠血清ALT、AST水平较正常组明显增高(P0.01);肝组织经HE染色镜下观察示小鼠肝组织内细胞呈现大量坏死的状态。姜黄素、生态动力素干预治疗后较模型组显著降低小鼠血清ALT、AST水平,组织学上减轻小鼠急性肝细胞坏死的程度。第二部分:探讨姜黄素联合生态动力素通过调节Nrf2氧化应激通路抗肝纤维化的作用及机制20%CC14油剂持续的注射可有效的诱导小鼠肝纤维化模型的形成,表现为较正常组小鼠分离血清中ALT、AST水平模型组明显增高;肝组织HE染色呈现出肝细胞有大量片状的坏死,细胞脂肪样病变,小叶结构紊乱,并且伴随炎症细胞的浸润,脉管区纤维组织增生并蔓延,肝实质内纤维组织增生显著;姜黄素、生态动力素及联合给药能显著减低(P0.01)小鼠血清ALT、AST水平,组织学上明显减轻小鼠肝细胞损伤和炎症细胞浸润。天狼猩红染色示小鼠肝纤维化程度较模型组同步明显减轻。姜黄素、生态动力素及联合给药组小鼠血清SOD、GSH-PX水平较模型组明显增高(P0.01),MDA水平较模型组减低。RealTime PCR检测结果示姜黄素、生态动力素及联合给药组小鼠肝组织内Nrf2、GSH-PX mRNA表达水平较模型组明显升高(P0.05)。但联合给药组与姜黄素组比较小鼠血清学检测结果无明显差异,肝纤维化程度差异不明显。结论:1.姜黄素和生态动力素均有抗急性肝损伤的作用。2.姜黄素和生态动力素均有抗肝纤维化的作用。3.姜黄素联合生态动力素抗肝纤维化的作用机制可能与Nrf2介导的氧化应激通路有关。4.联合用药未能明显增强姜黄素的抗肝纤维化作用。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

姜黄素,小鼠血清,小鼠

２．１邋ＥＬＩＳＡ试剂盒检测血清ＡＬＴ、ＡＳＴ的含量逡逑ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔注射ＣＣ１４邋２４ｈ后，ＣＣ１４模型组小鼠血清ＡＬＴ（６１５．５３５６．８５Ｕ／Ｌ）及邋ＡＳＴ（２７８．７４±９．７２Ｕ／Ｌ）水平较正常对照组邋ＡＬＴ（１７．９４±５．１８邋Ｕ、ＡＳＴ（１６．８４±０．５２Ｕ／Ｌ）明显升高，有显著差异（Ｐ＜０．０１）。说明ＣＣ１４单次可导致小鼠急性肝细胞的损伤。姜黄素组小鼠ＡＬＴ邋（３８８．０８邋±邋１２．４０Ｕ／ＬＡＳＴ（１５０．０８±３５．３５Ｕ／Ｌ）水平较模组明显降低，有统计学意义（／＞＜0．00。低生态动力素小鼠ＡＬＴ（５２８．３５±４０．６７Ｕ／Ｌ）水平略低于ＣＣ１４模型组，但无明计学差异（Ｐ＞0．0５）邋，邋ＡＳＴ（１６６．９０±６．９６Ｕ／Ｌ）水平较模型组明显降低，有差异（Ｐ＜０．０１）。中剂量生态动力素组小鼠ＡＬＴ（４１９．１６±邋４３．７４Ｕ／ＬＡＳＴ（１６８．０５±７．００Ｕ／Ｌ）邋ｚＫ平也较模型组明显降低，有统计学差异（尸＜0．0１）剂量生态动力素组小鼠邋ＡＬＴ（４１８．５６±３９．１８Ｕ／Ｌ）与邋ＡＳＴ（１７５．２５±１２．３３Ｕ／Ｌ平较模型组明显降低，有统计学差异（Ｐ＜０．０１）。逡逑Ａ逦＊＊逦Ｂ逡逑￣￣

小鼠血清,姜黄素,炎性细胞,多聚甲醛溶液

图２生态动力素对ＣＣ１４诱导的实验性急性肝损伤小鼠血清ＡＬＴ（Ｃ）和ＡＳＴ（Ｄ）水响，＊＊尸＜０．０１。ＣＣ１４＋Ｌ：低剂量生态动力素；ＣＣ１４＋Ｍ：中剂量生态动力素；ＣＣ１４＋Ｈ量生态动力素逡逑２．２姜黄素和生态动力素对ＣＣ１４诱导的急性肝损伤小鼠肝态的影响逡逑ＣＣ１４腹腔注射２４ｈ后，取小鼠肝组织用４％多聚甲醛溶液固定，ＨＥ染色。ＨＥ染色镜下观察（Ｘ邋１００）示正常对照组小鼠（图３－Ａ）肝小叶，肝细胞无肿胀坏死，肝细胞索排列整齐，肝细胞核大而圆。汇管区结无炎性细施浸润。而ＣＣ１４注射后小鼠（图３－Ｂ）肝组织局部区域出现大细胞变性坏死，大量炎性细胞的浸润。姜黄素组小鼠肝组织ＨＥ染色可亦有小片状坏死，可见少许炎性细胞，但程度均明显轻于模型组（图３－Ｃ）

【参考文献】