小儿豉翘清热颗粒及其臣药栀子的质量标准提升研究

发布时间：2020-06-19 00:16

【摘要】：小儿豉翘清热颗粒由连翘、炒栀子、淡豆豉、青蒿、薄荷等14味中药组成,现收录于2015版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)中,为济川药业集团独有的中成药,在治疗小儿风热感冒夹滞证方面有着良好的临床疗效。然而大多数中成药均存在以下几个问题:1.质量标准简单。2.药效物质基础不清。3.临床优势和作用特点不明确。所谓“药材好,药才好”,源头药材的质量决定了最终中成药的质量,因此从药材到中成药两方面的质量标准提升可以更好的全面控制和提升产品的质量。本课题来源于国家中药标准化项目-小儿豉翘清热颗粒的标准化建设,我们课题组承担了小儿豉翘清热颗粒及其臣药栀子的质量标准提升研究。《中国药典》中小儿豉翘清热颗粒质量标准包括连翘、大黄、赤芍、荆芥和黄芩5味药的TLC定性鉴别和栀子苷、连翘苷的定量分析,栀子质量标准包括栀子苷的TLC定性鉴别和定量分析。因中药具有多组分、多靶点等特点,只对单一或少数指标成分进行定性、定量分析不能全面反映其质量和临床功效,也不能满足市场的需求。因此,有必要对源头药材栀子和成品小儿豉翘清热颗粒进行质量标准提升研究。本论文首先对栀子和小儿豉翘清热颗粒的研究进展进行相关概述,其次在《中国药典》中栀子和小儿豉翘清热颗粒的质量标准基础上,一方面从TLC鉴别、HPLC指纹图、多成分含量测定及水分、灰分、重金属等检查项方面,对栀子及炒栀子进行了质量标准的提升研究;另一方面从TLC鉴别、HPLC指纹图谱和多成分含量测定方面,对小儿豉翘清热颗粒进行了质量标准的提升研究。研究内容概括如下:1、栀子质量标准提升研究基于《中国药典》中栀子质量标准,因原标准过于简单,无法全面准确反映栀子质量情况,故对其进行质量标准提升研究。(1)建立了乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷和西红花苷I的多指标TLC同时鉴别方法,各成分斑点清晰、分离较好,该方法专属性强、准确有效。通过对11个不同产地的33批栀子进行研究,结果表明不同产地质量差异较明显。(2)以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,检测波长为238 nm和440 nm,通过切换波长进行梯度洗脱,建立了栀子HPLC指纹图谱,方法学考察符合要求,确定了15个共有峰,所有批次相似度均在0.90以上,对其进行SPSS聚类分析和主成分分析,可将栀子样品分为3类,进一步通过计算F综合评分,结果表明相似度较好的情况下,不同产地栀子仍存在质量差异,以安徽、江西等地较优。(3)以栀子HPLC指纹图谱的色谱条件为基础,新建了去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、西红花苷I和西红花苷II 5个成分的HPLC含量测定方法,方法学考察符合要求,成分含量范围分别为0.61~4.26 mg/g、1.73~12.92 mg/g、51.79~82.76 mg/g、5.03~12.80 mg/g、0.42~2.28 mg/g;栀子苷含量最高,为其主要成分,京尼平龙胆双糖苷较其余成分含量差异较大。(4)在水分、灰分检查项的基础上新增了酸不溶性灰分和重金属,并规定了限度:酸不溶性灰分不得多于0.2%;铜Cu≤20000 ng/g,砷As≤2000 ng/g,镉Cd≤300 ng/g,汞Hg≤2000 ng/g,铅Pb≤5000 ng/g。2、炒栀子质量标准提升研究通过对栀子产量、市场和成分含量及稳定性等多方面综合考虑下,选取了江西产地栀子作为小儿豉翘清热颗粒中炒栀子药材来源。因小儿豉翘清热颗粒中栀子以炒栀子形式入药,故需对炒栀子进行质量标准提升研究。现收集到江西抚州的10批炒栀子,以新建立的栀子质量标准为基础,对其质量标准进行提升研究。(1)建立了乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷和西红花苷I的多指标TLC同时鉴别方法,各成分斑点清晰、分离较好,该方法专属性强、准确有效,研究结果表明不同批次间炒栀子质量稳定。(2)建立了炒栀子HPLC指纹图谱方法,方法学考察符合要求,确定了14个共有峰,相似度均大于0.99,聚类分析主要分为2类,结果表明不同批次间炒栀子整体质量较为稳定。(3)建立了炒栀子5种成分的HPLC含量测定方法,含量范围分别为去乙酰车叶草酸甲酯1.81~2.45 mg/g,京尼平龙胆双糖苷苷7.86~11.08 mg/g,栀子苷46.21~71.12mg/g,西红花苷I 0.99~1.82 mg/g,西红花苷II 0.11~0.21 mg/g。栀子苷含量波动较其他成分稍大,其余成分含量均较稳定;因西红花苷类成分属色素类,受热易分解,故炮制后含量较低。(4)在水分、灰分检查项的基础上,同时也增了酸不溶性灰分和重金属。3、小儿豉翘清热颗粒质量标准提升研究基于《中国药典》中小儿豉翘清热颗粒的质量标准,对小儿豉翘清热颗粒进行质量标准提升研究。(1)在药典已有连翘、大黄、荆芥、薄荷和赤芍5味药的TLC鉴别基础上,增加了炒栀子、青蒿、槟榔和柴胡的TLC鉴别,结果显示在相同位置上,供试品色谱与对照品或对照药材色谱有相同颜色的斑点,且对应阴性对照无干扰,成分斑点分离清晰,所有方法专属性强、简单、准确有效。(2)以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,检测波长为240 nm、280 nm和250 nm,通过切换波长进行梯度洗脱,建立了小儿豉翘清热颗粒的HPLC指纹图谱,方法学考察符合要求,确定了20个共有峰,样品相似度均在0.90以上。采用聚类分析和主成分分析法对结果进行全面综合分析,20批样品聚为3类:第1类为样品S13、S14、S15;第2类为样品S7、S10;剩余为第3类;主成分分析结果与聚类分析相一致,结合载荷图和主成分得分图发现由7号峰(芍药苷)和20号峰(甘草酸)峰面积大小导致了分类结果,结果表明除个别批次样品外,该产品整体质量较为稳定。(3)以小儿豉翘清热颗粒的HPLC指纹图谱方法为基础,建立了栀子苷、芍药苷、连翘酯苷A、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷和甘草酸7种有效成分的HPLC含量测定方法,含量范围分别为栀子苷4.03~5.97 mg/g,芍药苷2.22~3.94 mg/g,连翘酯苷A 7.63~9.67 mg/g,黄芩苷5.00~10.08 mg/g,连翘苷1.10~1.61 mg/g,汉黄芩苷0.86~1.74 mg/g,甘草酸1.61~2.81 mg/g。结果表明,所有样品栀子苷与连翘苷含量均优于2015版中国药典标准规定,不同批次间成分含量总体较为稳定。大部分无糖样品的有效成分含量均高于有糖样品,考虑可能与有糖制剂工艺有关。黄芩苷作为含量最高的成分,含量波动与其余成分相比较大,故后期需加强黄芩药材质量的管理控制,从而保证最终产品质量的稳定、均一。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R286.0
【图文】：

色谱,药典,条件比较,斑点

各成分斑点更为清晰，分离效果更优。A：中国药典 B：日本药典图2.1 不同国家药典展开条件比较Fig.2.1 Comparison of Pharmacopoeia Conditions in different countries3.2 样品分析将收集到的样品按“2.1”法制备供试品溶液，按“2.4”方法进行实验，薄层结果如图 2.2、2.3、2.4、2.5 所示：在日光下观看，在相同位置上，供试品色谱与对照品或对照药材色谱有相同颜色的斑点[1]，斑点从上到下依次为栀子苷 Rf=0.57、去乙酰车叶草酸甲酯Rf=0.33、京尼平龙胆双糖苷 Rf=0.14、西红花苷 I Rf=0.04，四个成分斑点清晰、成分均有

六安,安徽,唐河,斑点

小儿豉翘清热颗粒及其臣药栀子的质量标准提升研究离。去乙酰车叶草酸甲酯斑点颜色属 S19、S20、S21（安徽六安）较（安徽广德）较浅；京尼平龙胆双糖苷斑点颜色属 S16、S17、S18（江、S30（河南唐河）较深，S19、S20、S21（安徽六安）较浅；栀子苷斑、S18（江苏句容），S25、S26、S27（河南唐河）较深，S19、S20、浅；西红花苷 I 斑点颜色属 S19、S20、S21（安徽六安）较深，S31、州）较浅。

【参考文献】