FGFR-1介导的王不留行黄酮苷促内皮细胞增殖及血管生成的作用机制

发布时间：2020-06-19 04:31

【摘要】：王不留行黄酮苷(vaccarin)是王不留行中的主要有效成分。目前,已知的vaccarin的活性研究主要是王不留行黄酮苷对内皮细胞的作用。Vaccarin可以通过抑制Notch信号通路,减少过氧化氢诱导的EA·hy926内皮细胞凋亡。Vaccarin可以促进HMEC-1内皮细胞增殖和血管生成。但是,vaccarin促HMEC-1内皮细胞增殖和血管生成的靶受体和相关机制并不清楚。本研究将通过体外和体内实验,着重探讨vaccarin促内皮细胞增殖和血管形成的靶受体和相关机制。对vaccarin促内皮细胞增殖的活性进行了研究:利用SRB法发现vaccarin可以显著促进HMEC-1和EA·hy926这两株内皮细胞增殖,且这种促进作用呈现非剂量依赖性,其中最佳浓度为2.15μM。但在2.15μM的浓度下,vaccarin对NIH3T3,A549和RAW264.7这三株非内皮细胞无明显促增殖作用;利用台盼蓝染色和Hoechst33342染色发现vaccarin不会显著促进HMEC-1内皮细胞死亡和凋亡;利用流式细胞术检测细胞周期发现vaccarin能够显著促进HMEC-1内皮细胞从G0/G1期进入S期,且这种促进作用呈现非剂量依赖性,其中最佳浓度为2.15μM。进一步地对vaccarin促内皮细胞增殖的靶受体进行了研究:利用western blotting实验发现vaccarin对VEGFR-2的磷酸化无显著影响,而对FGFR-1及其下游信号分子ERK1/2的磷酸化具有显著促进作用,且利用抑制剂SU5402阻断FGFR-1后,vaccarin诱导的FGFR-1及其下游信号分子ERK1/2的磷酸化被显著抑制;利用SRB法发现阻断FGFR-1后,vaccarin的促内皮细胞增殖作用被显著抑制。进一步地对vaccarin促内皮细胞增殖的信号通路进行了研究:利用western blotting实验发现周期蛋白cyclinD1在FGFR-1介导的vaccarin促内皮细胞增殖信号通路中位于ERK1/2的下游。同时,vaccarin可以显著激活HMEC-1和EA hy926这两株内皮细胞的FGFR-1信号通路,而不能显著激活NIH3T3,A549和RAW264.7这三株非内皮细胞的FGFR-1信号通路;利用免疫荧光也发现vaccarin可以显著提高HMEC-1和EA hy926这两株内皮细胞的FGFR-1的磷酸化水平,而在NIH3T3,A549和RAW264.7这三株非内皮细胞上无上述现象;利用FGF-2抗体中和除去HMEC-1细胞培养基中FGF-2后发现vaccarin诱导的内皮细胞增殖被显著抑制,说明vaccarin是通过FGF-2间接地发挥促内皮细胞增殖作用的;利用ELISA法发现vaccarin可以显著提高HMEC-1细胞培养液中FGF-2的含量,且这种促进作用呈非剂量依赖性,其中最佳浓度为2.15μM。同时,在2.15μM的浓度下,vaccarin可以显著提高另一株内皮细胞EA hy926细胞培养液中FGF-2的含量,但是不能显著提高NIH3T3,A549和RAW264.7这三株非内皮细胞培养液中FGF-2的含量。接着,对vaccarin促血管生成的活性进行了研究:通过体外实验发现vaccarin可以促进内皮细胞迁移和成管;通过体内实验发现vaccarin可以促进小鼠体内种植的基质胶中的血管生成。进一步地对vaccarin促血管生成的机制进行了研究:通过体外实验发现阻断FGFR-1之后,vaccarin对内皮细胞迁移和成管的促进作用被显著抑制;通过体内实验发现阻断FGFR-1之后,vaccarin对小鼠体内种植的基质胶中血管生成的促进作用被显著抑制;通过体外实验发现vaccarin通过FGF-2间接地发挥促进内皮细胞迁移和成管地作用。综上所述,vaccarin通过激活FGFR-1信号通路促进了内皮细胞增殖和血管生成。
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285
【图文】：

王不留行,黄酮苷

及治疗闭经和乳腺炎等疾病中[2-4]。研究发现从王不留行中可括黄酮、三萜皂苷、环肽、生物碱、酚酸以及类固醇[5,6]。黄酮苷的研究黄酮苷(vaccarin)是从王不留行中分离提取出来的单体化合典（2015 版）中被认为是王不留行（Vaccariasegetalis）的主苷是一种黄酮糖苷，呈淡黄色颗粒状结晶，易溶于甲醇、甲醇等，难溶于氯仿、乙酸乙酯和石油醚等。王不留行黄酮苷，由于王不留行黄酮苷对内皮细胞的治疗作用，其受到越来点。王不留行黄酮苷可以通过抑制 Notch 信号通路，减少过内皮细胞凋亡，这证明王不留行黄酮苷可以用于糖尿病患者治疗[8]。王不留行黄酮苷在体外可以刺激 HMEC-1 细胞增殖管生成[9]。将王不留行黄酮苷附着于细菌纤维素膜后，可以机械性能，同时载有王不留行黄酮苷的细菌纤维素膜能够更，王不留行黄酮苷促内皮细胞增殖和血管生成的靶受体和相步研究。

信号通路

第一章绪论到 FGFR-1 信号转导中的特定功能：在近膜区域中的 Y463 负责Y653 和 Y654 在第二激酶结构域中对激酶活性有重要意义；Y-γ）[39]的结合位点。已知几种细胞内信号级联通过 FGFR-1 介导括 Ras 途径，Src 家族酪氨酸激酶，磷酸肌醇 3-激酶（PI3K）和，FGFR-1 的研究越来越受到关注。研究发现，肽酶 C56 的蛋白可以通过激活 FGFR-1 信号通路促进血管生成和骨生成[40]。还色素瘤糖蛋白 B（GPNMB）可以通过激活 FGFR-1 信号通路，促和成管，促进小鼠体内的基质胶中血管生成以及促进骨生成[41]。

【参考文献】