【摘要】:人参(Panax Ginseng)为五加科植物,是我国名贵的中药材,其具有生津止渴、提高机体免疫力的功效,常被用于滋补品。查阅文献可得,人参具有多种活性成分,其中皂苷类、多糖类是最主要的活性成分,其药理学活性主要表现在中枢神经系统、脑血管以及抗肿瘤方面。相对而言,人参的脂溶性成分研究较少,为了充分利用人参的有效成分,本文主要对人参倍半萜的抗肿瘤活性进行了系统性研究,并进一步阐述其相关作用机制,同时对5-氟尿嘧啶(5-FU)在抗肿瘤过程中引发的骨髓抑制进行了相关研究。其主要研究内容及结果如下:(1)人参倍半萜对H_(22)荷瘤小鼠的抗肿瘤活性及机制研究以ICR级雄性小鼠建立H_(22)荷瘤小鼠模型,分别给药14d后,眼球取血后脱臼处死,剥离肿瘤组织及各脏器并称取质量,计算抑瘤率及脏器指数,检测荷瘤小鼠血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、尿素氮(BUN)等肝肾指标,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-3(IL-3)、血管内皮生长因子(VEGF)的水平,HE染色观察脾脏组织以及肿瘤组织的病理学变化,western blot蛋白印迹法测定荷瘤小鼠肿瘤组织相关蛋白含量,通过上述结果分析人参倍半萜的抗肿瘤活性及其作用机制。通过测定荷瘤小鼠骨髓干细胞中转化生长因子(TGF-β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-4(IL-4)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)的水平,分析5-FU对荷瘤小鼠产生的骨髓抑制作用。结果表明:通过各项指标的观察及对比可得出,人参倍半萜能够有效地抑制肿瘤生长,在高剂量组最高抑瘤率可达到65.92%,在5-FU与高剂量SPG联合给药组抑瘤率可达到83.70%,与模型组相比,给药后荷瘤小鼠血清中AST,ALT,BUN及VEGF的水平明显降低,但IL-2,IL-3,TNF-α和INF-γ的水平显著升高;给药组荷瘤小鼠可观察到明显的肿瘤细胞凋亡;通过western blot测定肿瘤组织蛋白水平可得,SPG的抗肿瘤作用可通过下调Bcl-2和VEGF蛋白的表达,以及调控P38MAPK蛋白通道来抑制肿瘤生长;与5-FU组相比,在联合给药组小鼠血清中TGF-β的水平明显升高,改善了5-FU对荷瘤小鼠产生的骨髓抑制作用。结论:SPG对H_(22)荷瘤小鼠具有明显的抗肿瘤活性,其与5-FU在抗肿瘤过程中的联合使用具有协同作用,同时降低了5-FU的骨髓抑制作用。其抗肿瘤作用机制可能与下调Bcl-2及VEGF的表达,以及调控P38MAPK蛋白通道有关。(2)人参倍半萜对S_(180)荷瘤小鼠的抗肿瘤活性及机制研究首先建立小鼠S_(180)荷瘤小鼠模型,通过测定荷瘤小鼠体重、抑瘤率及各脏器指数,测定各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和血尿素氮(BUN)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死生长因子-α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)水平,HE染色观察各组小鼠肿瘤组织病理学变化,采用Western Blot法检测肿瘤组织中抗细胞凋亡因子(Bcl-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、p38对丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和p38对丝裂原活化蛋白激酶磷酸化(p-p38MAPK)蛋白的表达水平。并测定荷瘤小鼠骨髓血清细胞中转化生长因子(TGF-β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-4(IL-4)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF),促红细胞生成素(EPO)的水平。综合分析上述结果得出:随着SPG剂量的升高,抑瘤率明显升高,高剂量SPG组抑瘤率可达76.29%,5-FU与SPG联合给药组抑瘤率可达到85.92%。与模型组比较,低和高剂量SPG组以及联合给药组小鼠血清中IL-2和TNF-α的水平明显升高,ALT、AST、BUN和VEGF水平明显降低。HE染色,模型组细胞排列整齐紧密,可见大量细胞核,且生长状态良好,低和高剂量SPG组肿瘤组织细胞核数量明显减少,排列松散,联合给药组出现大面积肿瘤坏死区域。Western Blot分析得出,与模型组比较,联合给药组小鼠肿瘤组织中Bcl-2和VEGF蛋白表达水平明显降低,p-p38MAPK水平明显升高。在联合给药组小鼠血清中GM-CSF的水平明显升高,改善了5-FU在抗肿瘤过程中的骨髓抑制作用。结论:SPG具有明显的抗肿瘤活性,其与5-FU联合使用在抗肿瘤过程中具有协同作用,而且能够在一定程度上限制5-FU的骨髓抑制作用,其抗肿瘤作用可能是通过调节p38MAPK蛋白通道相关。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R285.5
【图文】: 图 1.1:人参倍半萜对荷瘤小鼠免疫器官的影响( x±s,n=8)Fig.1.1: Effects of SPG on immune organs of tumor-bearing mice( x±s,n=8)1.3.3 人参倍半萜对 H22荷瘤小鼠肿瘤质量的影响越来越多的文献表明,肿瘤质量的减少和抑制率表明了药物的抗肿瘤作用。肿瘤抑制率作为指标通常用于评价抗肿瘤疗效[83],肿瘤质量越小,也就说明药物对肿瘤的抑制作用越强。人参倍半萜对肿瘤的影响见表 1-3 和图 1.2,与模型组比较,5-FU 组肿瘤质量明显降低(P<0.01),SPG 组和联合给药组荷瘤小鼠肿瘤质量也明显降低。与5-FU 组比较,低剂量 SPG 组肿瘤重量有明显差异(P<0.05),高剂量 SPG 组肿瘤重量明显下降(P<0.01)。随着剂量的增加,SPG 组的肿瘤抑制率(TIR)指数增加。关于肿瘤重量,5-FU+SPG(2.5mg/kg)组与 5-FU 组无明显差异,5-FU+SPG(10mg/kg)组肿瘤重量明显低于 5-FU 组(P<0.01)。高剂量 SPG 组小鼠肿瘤抑制率接近 5-FU 组,可达到 65.92%,在高剂量 SPG 与 5-FU 联合给药组,最高抑瘤率可达到 83.70%,相对于 5-FU 组,抑瘤率提高了 14.82%。因此,
参倍半萜对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响( x±s,n=8f SPG on growth of tumor in tumor-bearing mice( x±剂量(mg/kg) 肿瘤重量(g) 1.35±0.2720 0.42±0.10bb2.5 0.77±0.17bbcc10 0.46±0.06bb20+2.5 0.34±0.16bb20+10 0.22±0.08bbcc<0.05,bbP<0.01;与 5-FU 比较 c P<0.05,cc P<0.01..
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本文编号:2723438
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